化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來源 | 視網(wǎng)膜 |
英文名稱 | Mouse Retinal Astrocyte Cells | 貨號 | YS-01X8529 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、節(jié)細(xì)胞層、纖維層、內(nèi)界膜。星形膠質(zhì)細(xì)胞為中樞系統(tǒng)中的伙伴元提供多種支持功能，如發(fā)育過程中的引導(dǎo)、終生的營養(yǎng)和代謝支持。大量研究表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞系統(tǒng)中功能多樣的細(xì)胞群之一。腦卒中和其他損傷時(shí)，正常星形膠質(zhì)細(xì)胞功能受損可嚴(yán)重影響元存活。視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞對元的穩(wěn)態(tài)和視網(wǎng)膜的功能至關(guān)重要。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳2-3代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞cDNAHASMC cDNA | DNA結(jié)合抑制因子4抗體 |
PCID2蛋白抗體 | 細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體 |
EHM2蛋白抗體 | 粒體蛋白18抗體 |
粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體 | 酸化動(dòng)力相關(guān)蛋白1抗體 |
βA3/A1-crystallin蛋白抗體 | 乙酰化和酸化組蛋白H3抗體 |
IFNA4 Others Rat 大鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
膀胱成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | NEK7 Others Human 人 NEK7 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FGF18 Others Mouse 小鼠 FGF18 / FGF-18 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TSPAN31 Others Human 人 TSPAN31 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Promocell C-28056 M2-Macrophage GenerationMedium DXF, M2-巨噬細(xì)胞生成培養(yǎng)基DXF 250ml | HA Others H6N4 甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-H045人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)原代細(xì)胞粒體蛋白18抗體 |
LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | A549, 人肺癌細(xì)胞系 |
人成纖維細(xì)胞;HFF | A-375(人惡性黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H123人小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17 |
SV-HUC-1人輸尿管上皮永生化細(xì)胞 SV-HUC-1 human ureter epithelial immortalized cell F12K培養(yǎng)基+10%FBS | 9號染色體開放閱讀框72抗體 |
電壓門控性鉀通道蛋白亞基KV6.3抗體 | PIK3IP1 Others Human 人 PIK3IP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體 | 胞內(nèi)活化的Notch1蛋白抗體 |
腦腸肽受體抗體 | IFNA4 Others Rat 大鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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