化工仪器网
详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的人子宫成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的人子宫成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 人子宫成纤维原代细胞 | 组织来源 | 子宫组织 |
英文名称 | Human Uterine Fibroblast Cells | 货号 | YS-01X7213 |
产品规格 | 5×10?Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
人子宫成纤维细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的子宫成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。子宫成纤维细胞的主要特征：①是子宫的重要细胞组成，在体外易于培养；②在子宫损伤后能修复和重塑子宫；③在子宫炎症时能有效控制炎症扩散。
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
mCF, 小鼠心脏成纤维细胞 小鼠杂交瘤细胞，7F2细胞 EL4. IL-2(淋巴瘤细胞) | ANGPTL5： 血管生成素相关蛋白5 0.2ml |
Anti-HPV 人类状瘤病毒抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh AARS2 丙氨酰tRNA合成酶2抗体 规格 0.2ml |
Anti-phospho-CBL2(Tyr774) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠0酸化原癌蛋白CBL2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ICAM-3/CD50 细胞间粘附分子-3抗体 规格 0.1ml |
APG4B/AUTL1 APG4B细胞自噬相关抗原 0.5mg | HSP47： 热休克蛋白-47抗体 0.1ml |
IgG/RBITC 罗丹明标记的羊抗小鼠IgG 0.3ml | Rhesus antibody Rh FAIM3 FAS凋亡抑制分子3抗体 规格 0.2ml |
人结直肠腺癌细胞;HCT-8 [HRT-18] | 293 人胚肾细胞 |
CL-0281HELF(人胚肺成纤维细胞)5×106cells/瓶×2 | rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞 |
人肺间充质干细胞RNAHPMSC miRNA5 μg | 中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1 |
原代系膜细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml | 兔肾细胞;RK-13 |
A673细胞，横纹肌瘤细胞 人非小细胞肺癌细胞,NCI-H838细胞 CL-0460U14-GFP(小鼠子细胞)5×106cells/瓶×2 | 人子宫成纤维原代细胞Rhesus antibody Rh ICAM-3/CD50 细胞间粘附分子-3抗体 规格 0.1ml |
FIGF Protein Rat 重组大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 标签) | NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人细胞裂解液 (阳性对照) |
犬肾细胞系/野生型;MDCK/wild | 人外根鞘细胞HHORSC |
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞 | Rhesus antibody Rh sIgA/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗人分泌型IgA 规格 0.1ml |
FA(Mouse Folic acid) ELISA Kit 小鼠 96T | CXCL12 Protein Human 重组人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 |
ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 毒蕈碱型乙酰受体M1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg | F-TESTO(Human Free Testoterone) ELISA Kit 人游离睾酮Multi-class antibodies规格： 48T |
MrpL12： 线粒体核糖体蛋白L12抗体 0.1ml | 人结直肠腺癌细胞;HCT-8 [HRT-18] |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
化工仪器网