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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的人终板软骨采用胶原酶 - 蛋白酶联合消化并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
实验室分离的人终板软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 人终板软骨原代细胞 | 组织来源 | 椎间盘 |
英文名称 | Human Endplate Chondrocyte Cells | 货号 | YS-01X8313 |
产品规格 | 5×10?Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
人终板软骨细胞分离自椎间盘终板软骨组织；椎体终板是椎体在生长发育过程中， 椎体上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈轻度凹陷，即为骨性终板。椎体终板的中央仍为一薄层透明软骨覆盖，并终生存在，即为软骨终板，上下软骨终板与髓核和纤维环连接共同构成椎间盘。椎体终板构成了椎间盘的上下边界，位于椎体中心的松质骨和椎间盘之间。是由软骨下骨和厚度相当的覆盖其上的软骨组成。主要作用是防止椎间盘髓核组织嵌入椎体，同时具有平衡分散应力的作用。成熟的终板软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些终板软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，终板软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，终板软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的终板软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
培养信息：
培养基：含FBS、EGF、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每3-4天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：梭形、多角形
传代特性：可传3代左右
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
人终板软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
WISH人羊膜细胞 Human WISH cells MEM(GIBCO)+10%FBS | ANKRD53： 锚蛋白重复域53抗体 0.2ml |
Anti-HPR1/p84 核基质p84蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh AAT/Tryptase α-1抗酶抗体 规格 0.1ml |
Anti-phospho-CBL2(Tyr731) /FITC 荧光素标记0酸化原癌蛋白CBL2抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ICAM4/CD242 细胞间粘附分子4抗体 规格 0.2ml |
apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human 载脂蛋白A1抗原 0.5mg | HPV16 E6 protein： 人类状瘤病毒16抗体 0.1ml |
Goat Anti-rabbit IgG/RBITC 罗丹明标记的羊抗兔IgG 0.3ml | Rhesus antibody Rh FAK/PTK2 粘着斑激酶抗体 规格 0.1ml |
PROK1 Protein Human 重组人 EG-VEGF / prokineticin-1 蛋白 (His 标签) | 人胎盘羊膜细胞培养基 100mL |
SAC-II B2细胞，小鼠腹水瘤细胞 BRL 3A(大鼠肝细胞) 人皮肤成纤维细胞;CCC-HSF-1 | CCL11 Protein Human 重组人 CCL11 蛋白 (His 标签) |
人胚肺成纤维细胞;HFL1 | 人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] |
Li-7 人肝癌细胞 | LIF Protein Mouse 重组小鼠 LIF 蛋白 (Fc 标签) |
狗肾细胞;Super Tube 胚胎成纤维细胞，3T6-Swiss albino细胞 Hed68细胞，果子狸肾上皮细胞 | 人终板软骨原代细胞Rhesus antibody Rh ICAM4/CD242 细胞间粘附分子4抗体 规格 0.2ml |
IL2 Protein Rat 重组大鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 | 小鼠颗粒元(MGC)(1×106) |
LTEP-P细胞，人小细胞肺癌细胞 小鼠前成骨细胞,MC-3T3细胞 CL-0130K-562(人慢性骨髓性白血病细胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠角膜内皮细胞培养基 100mL |
MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞 | Rhesus antibody Rh sIgA/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗人分泌型IgA 规格 0.1ml |
TIMP-3(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 3) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶抑制因子3 96T | CoC1/DDP(人卵巢耐药细胞亚株) 5×106cells/瓶×2 |
MMP-9(matrix metalloproteinase 9) 基质金属蛋白酶-9(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg | T(Human Testoterone) ELISA Kit 人睾酮Multi-class antibodies规格： 48T |
MrpL39： 线粒体核糖体蛋白L39 0.1ml | PROK1 Protein Human 重组人 EG-VEGF / prokineticin-1 蛋白 (His 标签) |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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