化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
?方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人心臟纖維原采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人心臟纖維原經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人心臟纖維原原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 心臟組織 |
英文名稱 | Human Cardiac Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X7593 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人心臟纖維原細(xì)胞分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%，其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成。纖維細(xì)胞是機(jī)能不活躍的成纖維細(xì)胞。胞體呈梭形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。電鏡下可見(jiàn)，細(xì)胞中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體均不發(fā)達(dá)。當(dāng)組織受損時(shí)，纖維細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞而參與修復(fù)過(guò)程。纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞是處于不同功能狀態(tài)的同一種細(xì)胞，如在組織損傷后的修復(fù)過(guò)程中，纖維細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細(xì)胞。纖維細(xì)胞較小，呈多角形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核亦較小，染色較深，電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達(dá)。成纖維細(xì)胞較大，呈星形或梭形，有突起，細(xì)胞核呈卵圓形，染色質(zhì)稀疏，染色淡，核仁明顯，胞質(zhì)較多。成纖維細(xì)胞能合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和蛋白多糖，形成膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維以及基質(zhì)成分。心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對(duì)心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成，當(dāng)心肌損傷時(shí)能產(chǎn)生旁分泌生長(zhǎng)因子。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中常見(jiàn)的細(xì)胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動(dòng)也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。因此，對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個(gè)重點(diǎn)。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
L6大鼠成肌細(xì)胞 L6 rat skeletal myoblasts DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | ALS2CR1： 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml |
Anti-Heparanase 乙酰肝素酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | Rhesus antibody Rh ABC2/C17orf71 癌增強(qiáng)蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Caveolin-3/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ID1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 規(guī)格 0.1ml |
IRS-1 胰島素受體底物-1(抗原) 0.5mg | HHV8 ORF50： 人類皰疹病毒8抗體 0.2ml |
IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM107A 腎細(xì)胞癌下調(diào)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
IGFBP3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽) | CL-0382MDA-MB-415(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | EAC 小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞 |
大鼠腦成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IFNL3 Protein Human 重組人 IFNL3 / IL28B / Ierleukin-28B 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
大鼠腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | Chang liver (CCL13) (人張氏肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
Super Tube狗腎細(xì)胞 Super Tube canine kidney cells D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | 人心臟纖維原原代細(xì)胞Rhesus antibody Rh ID1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 規(guī)格 0.1ml |
NCI-H358(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | SECTM1 Others Human 人 SECTM1 / K12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
P3X63Ag8細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞 人十二指腸腺癌細(xì)胞,HuTu-80細(xì)胞 CM-H029人臍帶單核細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-HEK-a |
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 | Rhesus antibody Rh sIgA/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.1ml |
OSM(Human Oncostatin-M) ELISA KIT 人抑瘤素M 96T | IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標(biāo)簽) |
CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 ) G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | CT(Human Calcitonin) ELISA Kit 人降鈣素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MHC Class II： 組織相容性復(fù)合體蛋白2抗體 0.2ml | IGFBP3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)