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详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
公司实验室分离的人肾成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
公司实验室分离的人肾成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 人肾成纤维原代细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Human Renal Fibroblast Cells | 货号 | YS-01X7265 |
产品规格 | 5×10?Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
人肾成纤维细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司产品：
雪旺氏细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml) | FE ELISA Kit 大鼠铁蛋白Multi-class antibodies规格： 48T |
C1orf131： 1号染色体开放阅读框131抗体 0.2ml | phospho-GSK-3 Beta(Ser9)： 0酸化糖原合酶激酶-3β抗体 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CENPA 着丝粒蛋白A 规格 0.1ml | PCDH1： 原钙粘附蛋白1抗体 0.2ml |
Anti-NuMA/FITC 荧光素标记核有丝分裂器NuMA蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生长抑制DNA损伤基因153抗原 0.5mg |
Goat Anti-human IgG/Gold 金标记羊抗人IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies规格： 0.5ml | MSH2： 错配修复蛋白2抗体 0.1ml |
ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照) | FZD1 Others Mouse 小鼠 FZD1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
人脉络丛成纤维细胞HCPF | FES Others Human 人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) |
HWP visceral Pellet 人类内脏白前脂肪细胞团块 > 1 mio.cells 人真皮微血管内皮细胞总RNAHDMEC NA | F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO细胞裂解液 (阳性对照) |
GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) | 牛陀螺状细胞;BT 鸡淋巴瘤细胞，DT40细胞 Kert-3细胞，小鼠肾癌细胞 |
T-109B弹(含100mL酶解缓冲液)10mL | 人肾成纤维原代细胞PCDH1： 原钙粘附蛋白1抗体 0.2ml |
杂交瘤(B类);Z172A4C4C6F3G12 Butt's 淋巴瘤细胞，Raji细胞 HBZY-1细胞，大鼠肾小球系膜细胞EC(HBZY-1) | 人间充质干细胞-肝脏RNAHMSC-hp miRNA5 μg |
人卵巢畸胎瘤细胞;PA-1 | PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) |
IL13RA1 Others Mouse 小鼠 IL-13Ra1 人细胞裂解液 (阳性对照) | Anti-IL-8/FITC 荧光素标记兔抗人、、猪、羊、兔白介素8抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
Anti-RPLP0 酸性核糖体0蛋白大亚基P0抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml | Hce-8693细胞，人盲肠腺癌细胞(未分化) 人视网膜母细胞瘤,Rb细胞 人Burkkit淋巴瘤细胞;Daudi |
Rhesus antibody Rh phospho-FRS2(Tyr436) 0酸化成纤维细胞生长因子受体底物2抗体 规格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHDC5 kelch样蛋白5抗体 规格 0.2ml |
NF-KapB p65 (Rabbit nuclear factor-KapB p65) ELISA Kit 兔核因子κB亚基p65亲和肽 96T | ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人细胞裂解液 (阳性对照) |
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
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