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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法，在培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)缺失數(shù)天后經(jīng)搖床震蕩收集脫落細(xì)胞制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人小膠質(zhì)經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 腦組織 |
英文名稱(chēng) | Human Microglia Cells | 貨號(hào) | YS-01X7393 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人小膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積)；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質(zhì)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞的一種，相當(dāng)于腦和脊髓中的巨噬細(xì)胞，是中樞系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細(xì)胞大約占大腦中的膠質(zhì)細(xì)胞的20%，小膠質(zhì)細(xì)胞不停地清除著中樞系統(tǒng)中的損壞的，斑塊及感染性物質(zhì)。無(wú)數(shù)臨床上和病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細(xì)胞在退化類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過(guò)多激活或失控的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)引起毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來(lái)源，如腫瘤壞死因子(TNF)，一氧化氮，白介素等有毒性的物質(zhì)。小膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能：①膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過(guò)程中；②當(dāng)程序性細(xì)胞死亡時(shí)，或在大腦發(fā)育的過(guò)程中，中樞系統(tǒng)受損或受到病理?yè)p壞時(shí)，膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細(xì)胞；③膠質(zhì)細(xì)胞能在Ⅱ類(lèi)組織相容性復(fù)合體表達(dá)CD-4陽(yáng)性T細(xì)胞時(shí)表達(dá)抗原，能進(jìn)行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織共享抗原。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 （12mM）
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
CNE1細(xì)胞，人鼻咽癌細(xì)胞(高分化) 小鼠骨髓瘤細(xì)胞,P3-X63-Ag8.653細(xì)胞 草魚(yú)肝臟細(xì)胞;L8824 | CXCR3(Mouse CXC-chemokine receptor 3) ELISA KIT 小鼠CXC趨化因子受體3 96T |
RPLP2： 酸性核糖體0蛋白P2抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Rab27a RAM-11抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HCV-NS4a/FITC 熒光素標(biāo)記丙型肝炎病毒-NS4a抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C6orf62： 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框62抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRMS1 癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CTSC/PALS/DPP-I/FITC 熒光素標(biāo)記組織蛋白酶C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
原活化蛋白激酶3抗體 Anti-MAPK1/ERK3 0.1ml | phospho-Androgen Receptor (Ser515)： 0酸化雄激素受體抗體 0.1ml |
NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | U87MG 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 |
CL-0307SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 |
小鼠卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL24 Protein Human 重組人 IL-24 / MDA-7 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928 | CL-0072Daudi(人淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
F98大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 F98 rat glioma cells DMEM+10%FBS | 人神經(jīng)小膠質(zhì)原代細(xì)胞C6orf62： 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框62抗體 0.2ml |
動(dòng)物星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基AM-a | MN-c, 小鼠皮質(zhì)元 |
CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 人母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y |
人腎癌細(xì)胞;A498 | IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GSTA3 S轉(zhuǎn)移酶A3抗體 規(guī)格 0.1ml | 人前列腺平滑肌細(xì)胞HPSMC |
EB3： 微管相關(guān)蛋白EB家族3抗體 0.2ml | Anti-Lpin1 protein Lpin1 抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TG(Mouse Thyroglobulin) ELISA Kit 小鼠甲狀腺球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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