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詳細介紹
人臍靜脈平滑肌原代細胞
人臍靜脈平滑肌細胞分離自臍帶組織；它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。血管平滑肌是許多重大血管疾病的細胞基礎(chǔ)；血管平滑肌細胞的異常增加的生長潛力在血管疾病發(fā)生過程中起決定作用。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物，同時從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細胞方法相對成熟，使得體外培養(yǎng)的臍靜脈平滑肌細胞作為研究血管的模型細胞。臍靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
英文名稱 | Human Umbilical Vein Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 臍帶組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7296 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人臍靜脈平滑肌細胞
組織來源：臍帶組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人臍靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人臍靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-C 卵巢癌細胞，HO-8910細胞 CHO/dhFr-細胞，中國倉鼠腎細胞(二氫還原酶缺陷型) | Rhesus antibody Rh GH/Growth Hormone 生長激素抗體 規(guī)格 0.1ml |
Human Cyclin-D1 ELISA Kit 人細胞周期素D1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IFN gamma： 干擾素-γ/IFN-γ抗體 0.1ml | P III NT ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前膠原基端肽 96T |
Rhesus antibody Rh rHPV 重組人瘤病毒抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Langerin/CD207/FITC 熒光素標(biāo)記白細胞分化抗原CD207抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser416) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | B7-2/sCD86(Human soluble Cluster of differentiation 86) ELISA Kit 人可溶性CD86 96T |
人胚胎膀胱組織來源細胞;CCC-HB-2 | KMML1 小白鼠肺成纖維樣細胞 |
CM-H075人腎足突細胞培養(yǎng)基100mL | QBC-939, 人膽管癌細胞 |
膀胱上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | EL4 小鼠淋巴瘤細胞 |
大鼠纖維母細胞;1/EJ 1-1 | 總抗氧化能力檢測試劑盒 TACA |
人上皮細胞;Ca Ski 大鼠腸巨噬細胞培養(yǎng)基 100mL | 人臍靜脈平滑肌原代細胞P III NT ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前膠原基端肽 96T |
人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16 | CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H039人小腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
A875(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 | Rhesus antibody Rh APOC3 載脂蛋白C3抗體 規(guī)格 0.2ml |
Bad： 相關(guān)死亡促進因子Bad抗體 0.1ml | 小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6 |
Anti-SRC3/KAT13B/AIB1/FITC 熒光素標(biāo)記類固醇受體輔助活化因子-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PTP4A2： 肝再生0酸酯酶2抗體 0.2ml |
Anti-CD163/M130/FITC 熒光素標(biāo)記CD163抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人胚胎膀胱組織來源細胞;CCC-HB-2 |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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