化工仪器网
详细介绍
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用，不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗！
细胞属性：
方法简介
实验室分离的人滑膜成纤维细胞采用混合酶消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测
实验室分离的人滑膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 人滑膜成纤维原代细胞（骨性关节炎) | 组织来源 | 滑膜 |
英文名称 | Human Synovial Fibroblast Cells (Osteoarthritis) | 货号 | YS-01X8295 |
产品规格 | 5×10?Cells/T25培养瓶 | 用途 | 仅供科研实验 |
细胞简介：
人滑膜成纤维细胞（骨性关节炎）分离自滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构，各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征，其病理改变累及关节的各个组成部分，但绝不仅局限于软骨，还包括软骨下骨、滑膜、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响，相互作用，共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的大细胞群体，是维持关节正常功能的重要组织结构，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤维分布?；び?span>A型（巨噬样滑膜细胞）、B型（成纤维样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。类风湿关节炎（RA）是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。RA的发病可能与遗传、感染、性激素等有关。RA关节炎的病理主要有滑膜衬里细胞增生、间质大量炎性细胞浸润，以及微血管的新生、血管翳的形成及软骨和骨组织的破坏等。体外培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞对于研究类风湿关节炎疾病的发生机理、治疗具有重要意义。退行性骨关节病又称骨关节炎（OA）、退行性关节炎、老年性关节炎、肥大性关节炎，是一种退行性病变，系由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生。本病多见于中老年人群，好发于负重关节及活动量较多的关节（如，颈椎、腰椎、膝关节、髋关节等）。过度负重或使用这些关节，均可促进退行性变化的发生。临床表现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等。
培养信息：
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
传代特性：可传3-5代左右
消化液：0.25%
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
人滑膜成纤维细胞（骨性关节炎）体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
操作步骤：
1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
公司产品：
CM-H002人肺大动脉内皮细胞培养基100mL | Dyn(Human dynorphin) ELISA Kit 人强啡肽 96T |
RIPK-1： 丝酸苏酸激酶1受体相互作用蛋白抗体 0.1ml | Rhesus antibody Rh RAB8 ras癌基因家族Rab8蛋白抗体(原癌基因c MEL) 规格 0.1ml |
Anti-HCCR-1/FITC 荧光素标记人基因/bri3结合蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml | CaMKK1： 钙调蛋白激酶激酶α抗体CaMKKα 0.1ml |
Rhesus antibody Rh BS69/Adenovirus 5 E1A binding protein 腺病毒5结合蛋白BS69抗体(骨形态发生蛋白受体相关分子1) 规格 0.2ml | Anti-CRTAM/FITC 荧光素标记CRTAM抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml |
表皮生长因子受体抗体 Anti-EGF-R 0.1ml | phospho-AMPK alpha 1 (Ser487)： 0酸化腺苷单0酸活化蛋白激酶α1抗体 0.1ml |
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株 | 人脑微血管内皮细胞培养基 100mL |
MC3T3-E1细胞，小鼠成骨细胞系 V79(中国仓鼠肺细胞) 家兔骨髓间充质干细胞;2012083MSC | EFNB2 Protein Mouse 重组小鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (Fc 标签) |
JEG-3 人绒毛膜癌细胞 | VEGFC Protein Human 重组人 VEGF-C 蛋白 (His 标签) |
MDBK (NBL-1) 牛肾细胞 | CL-0047C6(大鼠胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×2 |
WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1 of normal human prostate somal immortalized cell DMEM+5%FBS | 人滑膜成纤维原代细胞（骨性关节炎)CaMKK1： 钙调蛋白激酶激酶α抗体CaMKKα 0.1ml |
大鼠雪旺细胞RSC | CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤细胞)5×106cells/瓶×2 |
CD97 Others Human 人 CD97 人细胞裂解液 (阳性对照) | IL7 Protein Human 重组人 IL7 / ierleukin 7 蛋白 |
EB病毒转化的人B淋巴细胞(彝族);KM934 | Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗猪IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GUK1/Guanylate kinase 鸟苷酸激酶GMK抗体 规格 0.2ml | 人气管平滑肌细胞总RNAHTSMC NA |
Folate Receptor 4： 受体4抗体 0.2ml | Anti-LFABP/FABP-1 肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml |
PSA(Mouse prostate specific antigen) ELISA Kit 小鼠前列腺特异性抗原Multi-class antibodies规格： 48T | BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株 |
化工仪器网