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人瘢痕疙瘩成纖維原代細(xì)胞
人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞分離自皮膚瘢痕疙瘩組織；瘢痕疙瘩，俗稱疤痕疙瘩，是皮膚傷口愈合或不明原因所致皮膚損傷愈合后所形成的過度生長(zhǎng)的異常瘢痕組織，目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為各種原因?qū)е碌鸟：廴缇哂幸韵绿攸c(diǎn)，可診斷為瘢痕疙瘩：①病變超過原始皮膚損傷范圍；②呈持續(xù)性生長(zhǎng)；③高起皮膚表面、質(zhì)硬韌、顏色發(fā)紅的結(jié)節(jié)狀、條索狀或片狀腫塊。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞同正常皮膚成纖維細(xì)胞在形態(tài)上沒有表現(xiàn)出明顯的差異。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)同正常皮膚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的差別。癜痕成纖維細(xì)胞對(duì)血清的依賴性低于正常皮膚成纖維細(xì)胞。
英文名稱 | Human Keloid Fibroblast cells | 組織來源 | 皮膚組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7680 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞
組織來源：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人瘢痕疙瘩成纖維采用先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人瘢痕疙瘩成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7 | OVA sIgE ELISA Kit 大鼠卵清蛋白特異性IgEMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf194： 1號(hào)染色體開放閱讀框194抗體 0.2ml | Guanylyl Cyclase alpha 1： 鳥苷酸環(huán)化酶α1/GCS-α-1抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CGB 嗜鉻粒素B抗體 規(guī)格 0.1ml | pan methyl Lysine： 泛甲基賴酸抗體 0.2ml |
Anti-NKG2D/CD314 /FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞受體/自然殺傷細(xì)胞活化性受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | GZMB/CCPI(Granzyme B) 顆粒酶B抗原 0.5mg |
Rabbit Anti-chi IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml | MLCK： 肌球蛋白輕鏈激酶抗體 0.1ml |
PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | EPOR Others Human 人 EPO Receptor / EPOR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5 | SDC4 Others Mouse 小鼠 Syndecan-4 / SDC4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Promocell C-26040 Placeal Epithelial CellGrowth Medium, 胎盤上皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(即用型) 500ml | PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9803 人顱蓋造骨細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | SK-OV-3細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞 大鼠皮層元細(xì)胞,RN-c細(xì)胞 胃粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基-2(用于心肌成纖維細(xì)胞)FM-2 | 人瘢痕疙瘩成纖維原代細(xì)胞pan methyl Lysine： 泛甲基賴酸抗體 0.2ml |
A549, 人肺癌細(xì)胞系 T細(xì)胞白血病細(xì)胞,HPB-ALL細(xì)胞 RKO(結(jié)腸腺癌細(xì)胞) | 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204 |
人張氏肝細(xì)胞;Chang liver | IL12B Others Rat 大鼠 IL12B / IL-12B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SERPINF2 Others Human 人 SerpinF2 / SERPINF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-phospho-IKK gamma (Ser85) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-RET/C ret 指狀蛋白RET抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;C918 大鼠前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Rhesus antibody Rh Phospho-NFKB p65(Ser276) 0酸化細(xì)胞核因子NF-κB p65抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLK11 11抗體 規(guī)格 0.1ml |
MHC ELISA Kit 魚類主要組織相容性復(fù)合體 96T | PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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