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詳細(xì)介紹
雞肺微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞
雞肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細(xì)胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細(xì)胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對(duì)于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。
英文名稱 | Chicken Pulmonary Microvascular Endothelial Cells | 組織來源 | 肺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8278 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：雞肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：肺
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
雞肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺微血管內(nèi)皮采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK | Anti-TREML1/TLT1 髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit 人酸性0酸酶 96T | Anti-Microsporidia/FITC 熒光素標(biāo)記蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TM7SF2/DHCR14A 脫氫還原酶14抗體 規(guī)格 0.2ml | CA-2(Human carbonic anhydrase 2) ELISA Kit 人酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HCA25a： 肝癌相關(guān)抗原hca25a 0.2ml | Rhesus antibody Rh CCDC147 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白147抗體 規(guī)格 0.2ml |
FBXO7： F-box蛋白家族FBXO7抗體 0.2ml | bFGF-9 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
LAYN Others Rat 大鼠 Layilin / LAYN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYM |
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-2 | IL7R Others Rat 大鼠 IL7R / IL7RA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人食道上皮細(xì)胞(HEEC)(5×105 ) RN-c, 大鼠皮質(zhì)元 Rattus | EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CSF2RA Others Human 人 GM-CSFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | SK-NEP-1(人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PT-67(病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞) |
大額牛皮膚細(xì)胞;BFR-S3 | 雞肺微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞CA-2(Human carbonic anhydrase 2) ELISA Kit 人酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA-h)(5×105) kasumi-1, 人白血病細(xì)胞株 Human | 小鼠黑色素瘤細(xì)胞;B16-F1 |
IFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (His 標(biāo)簽) | TT人甲狀腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 TT human thyroid duct carcinoma cells F-12K+10%FBS |
PROK1 Others Human 人 EG-VEGF / prokineticin-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-PRCP/FITC 熒光素標(biāo)記脯氨酰羧肽酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SLC22A6： 陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體 0.1ml | SERPINA12 Others Human 人 Vaspin / SerpinA12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SREBP-2： 調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml | CAMK4： 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶4抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml | LAYN Others Rat 大鼠 Layilin / LAYN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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