詳細介紹
雞肺成纖維原代細胞
雞肺成纖維細胞分離自肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來;成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持肺器官的正常形態(tài),合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
英文名稱 | Chicken Lung Fibroblast Cells | 組織來源 | 肺 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產品貨號 | YS-01X8277 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產品名稱:雞肺成纖維細胞
組織來源:肺
產品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
雞肺成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的雞肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的雞肺成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
小鼠骨髓瘤細胞;Fox-NY 小鼠肺大靜脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | Rhesus antibody Rh GIRK1 G蛋白激活內向通道1抗體 規(guī)格 0.1ml |
AFP-L2(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2) ELISA Kit 人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T | Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗親和素 0.1ml |
intestinal FABP: 小腸型脂肪酸結合蛋白抗體 0.1ml | APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RMND1 減數分裂同源蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-Ku-80/FITC 熒光素標記DNA修復酶Ku-80抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 0酸化CREB轉錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格 0.1ml | LBP ELISA Kit 大鼠脂多糖結合蛋白 96T |
人臍帶血單個核細胞 Human | NCI-H1975 人肺腺癌細胞 |
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細胞株 | DKK1 Protein Human 重組人 DKK1 / Dkk-1 蛋白 (His 標簽) |
CL-0179P19(小鼠畸胎瘤細胞)5×106cells/瓶×2 | PC-12(未分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化) |
T-110A透明質酸酶(含10mL酶解緩沖液)1mL | 間充質干細胞脂肪細胞分化生長添加物MADS |
人結直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T] 大鼠雪旺氏細胞培養(yǎng)基 100mL | 雞肺成纖維原代細胞APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子抗體 96T |
散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21 | Promocell C-28014 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Diff. Medium w/o, 間充質干細胞軟骨分化培養(yǎng)基無誘導劑(即用型) 100ml |
KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H008人氣管上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
人前列腺癌低轉移細胞株;PC-3M-2B4 | Rhesus antibody Rh AQP0/MIP26 水通道蛋白0抗體 規(guī)格 0.1ml |
BXDC2: BXDC2蛋白抗體 0.2ml | 人腹膜毛細血管內皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
Anti-TAK1/FITC 熒光素標記轉化生長因子β活化激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | Phospho-PLK1 (Thr210): 0酸化絲/蘇酸蛋白激酶Plk1抗體 0.1ml |
Anti-nectin 2/CD112/FITC 熒光素標記細胞黏附分子CD112抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml | 人臍帶血單個核細胞 Human |
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。