大鼠食管平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：兔原代羊膜胚胎細(xì)胞 WISH(人羊膜細(xì)胞) 293ET 人胚細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞） 1ml/T75 IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞 SiHa 人頸鱗癌細(xì)胞 人原代微血管周細(xì)胞

大鼠食管平滑肌原代細(xì)胞

大鼠食管平滑肌細(xì)胞分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿過(guò)膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

產(chǎn)品名稱：大鼠食管平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源：食管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)試劑盒 ，英文名： TGFβ1 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)試劑盒

MouseActivinAELISAKit 小鼠活化素A(Activin-A)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumankeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子

微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性酶動(dòng)力比色法定量試劑盒20次

大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit，大鼠抗IgE受體抗體ELISAKit，

小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit 大鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)試劑盒

HumanProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit 人前列腺素F2α(PGF2α)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanc-jun試劑盒人c-jun試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白賴特異性脫甲基酶1(LYSINESPECIFICDEMETHYLASE-1;LSD-1)活性熒光定量試劑盒

Humaotavirus，RVIgMELISAKit人輪狀病毒(RV)IgM試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor IX (F IX) ELISA Kit 人Ⅸ(FⅨ)試劑盒

Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISAKit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human17-Hydroxyprogesterone,17-OHP試劑盒人17羥孕同(17-OHP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測(cè)定試劑盒20/200次

MouseAquaporin0,AQP-0ELISAKit小鼠水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標(biāo)簽) Protein

鈣結(jié)合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CST2 Others Human 人 CST2 / Cystatin-2 / Cystatin-SA 人細(xì)胞裂解液   APCDD1 Others Human 人 APCDD1 人細(xì)胞裂解液   B4GALT1 Others Human 人 B4GALT1 / GGTB2 人細(xì)胞裂解液 小鼠原代氣管上皮細(xì)胞 兔原代星形膠質(zhì)細(xì)胞

大鼠食管平滑肌原代細(xì)胞堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)重組蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

HIF1A Protein Human 重組人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

SERPINA1A重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

CD4 Protein Ferret 重組雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

CETN2重組人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein