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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠精原干采用先機械吹打、后消化，結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠精原干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠精原干原代細胞 | 組織來源 | 睪丸組織 |
英文名稱 | Rat Spermatogonial Stem Cells | 貨號 | YS-01X7523 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細胞，是成體內(nèi)的定向干細胞。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調(diào)節(jié)機制的深入研究，精子發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉(zhuǎn)染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動睪丸內(nèi)，精子發(fā)生時一個受高度調(diào)控和持續(xù)的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數(shù)量，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至最后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的最原始細胞，也是動物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學、醫(yī)學、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態(tài) 球形
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
豚鼠(Coisol)試劑盒 ，英文名： Coisol ELISA Kit
People of low molecular weight protein 7/ proteasome beta type 9 (LMP7/PSMB9) ELISA Kit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)試劑盒
MonkeyCollagenaseIELISAKit膠原酶I(CollagenaseI)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforBJP(HumanBence-Jonesprotein)ELISAKit人本周蛋白
細菌尿脫羧酶試劑盒20次
Rabbitlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
豬白介素1β (IL-1β)ELISA 試劑盒
Human ai Mi2 aibody (ai-Mi2-Ab) ELISA Kit 人抗Mi2抗體(ai-Mi2-Ab)試劑盒
PorcineN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforALA/LCA(Humanai-lymphocytotoxicaibody)ELISAKit人抗淋巴細胞毒抗體
血液型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性熒光定量試劑盒20次
MouseUreaplasmaurealyticumaibody,UU-AbELISAKit小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)試劑盒
人抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit ELISA.
人抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit ELISA.
人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit ELISA.
ARSA重組小鼠 Arylsulfatase A / ARSA 蛋白 Protein
c-Myc tag c-Myc tag標簽多肽 0.5mgc-Myc tag c-Myc tag標簽多肽
YWHAH重組人 14-3-3 eta / YWHAH 蛋白 (GST 標簽) Protein
IL2RG Protein Human 重組人 IL2RG / CD132 蛋白
RTN4R Protein Mouse 重組小鼠 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 蛋白
CDH15 Others Rat 大鼠 Cadherin-15 / CDH15 人細胞裂解液 HEF細胞，人胚纖維細胞系 變形桿菌 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA CL-0429Romas(人淋巴瘤細胞) 小鼠原代牙周膜干細胞 大鼠原代腎上腺皮質(zhì)細胞
大鼠精原干原代細胞Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)
IL5RA Protein Human 重組人 IL5Ra / CD125 蛋白
SCGB1A1重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 Protein
GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白
MAG重組人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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