NCI-H1299 細胞專用培養(yǎng)基常使用 RPMI - 1640 培養(yǎng)基，添加 10% - 20% 的胎牛血清、谷an酰胺等成分，為 NCI - H1299 細胞（人非小細胞肺癌細胞）提供適宜的生長環(huán)境，維持細胞的生長和代謝，適合其在體外的培養(yǎng)和實驗研究。

NCI-H1299 細胞專用培養(yǎng)基

NCI-H1299 細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經過長期測試，本產品可保持NCI-H1299 細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產品中已包含NCI-H1299細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于NCI-H1299 細胞的培養(yǎng)。

產品主要成分：

RPMI-1640 基礎培養(yǎng)基             430 ml

特級胎牛血清     50 ml

P/S            5ml

GlutaMAX-1               5 ml

HEPES 1M Buffer solution          5 ml

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉         5 ml

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存1個月；-20℃，避光，保存3個月。

1）復蘇NCI-H1299 細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查NCI-H1299 細胞密度。

2）細胞傳代：如果NCI-H1299 細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗NCI-H1299 細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若NCI-H1299 細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待NCI-H1299 細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用NCI-H1299 細胞時應注意無菌操作，避免污染。

2.本產品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本NCI-H1299 細胞的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.所有產品請于保質期內使用，超出保質期，必須放棄使用。

5.本產品只供進一步科研使用，不可應用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響NCI-H1299 細胞正常使用。