详细介绍
小鼠胚胎成纤维细胞;Psi2DAP培养悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入*培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入*培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
细胞名称 小鼠胚胎成纤维细胞;Psi2DAP培养
形态特性 成纤维细胞
品牌 贴壁生长
特征特性 这株细胞生成一种可以感染小鼠细胞的载体。 Psi2 DAP细胞生成的载体编码了人类胎盘碱性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 这株细胞通过Psi2细胞插入一个重组的逆转录病毒(DAP)基因组衍生而来。 被这种Psi2 DAP产生的载体感染的细胞表达的磷酸酯酶可用组织化学方法检测,可以用作体内追踪他们命运的标记。 这些细胞也可能产生辅助病毒。 检测辅助病毒的方法或其他逆转录病毒技术,请参考Cepko, C.L. Lineage analysis and immor
贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml*培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入*培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 荧光素标记核转录因子NF-κB受体抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies规格: 0.1ml
嗜铬粒素A抗体 Anti-CGA 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗马IgM 0.1ml
Fibulin 1 英文名称: “衰老关键蛋白”抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2抗体 规格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies规格: 0.1ml
PR(Progestogerone receptor)Human 人孕激素受体Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Claudin 4 紧密连接蛋白4抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NOC3L/FAD24 脂肪细胞分化因子24 规格 0.2ml
Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit 人β乳球蛋白 96T
TUBA1C 英文名称: 微管相关蛋白α6抗体 0.1ml
C1orf112 英文名称: 1号染色体开放阅读框112抗体 0.2ml
Anti-Claudin 4 紧密连接蛋白4抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Syntenin 2 英文名称: 多配体聚糖结合蛋白2抗体 0.2ml
PHC1 英文名称: 早期发育调控蛋白1抗体 0.2ml
增殖细胞核抗原抗体 Anti-PCNA 0.1ml
Anti-SRG5/SPATA12/FITC 荧光素标记发生相关基因5抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NF1(Ser2515) 磷酸化1型神经纤维瘤抗体 规格 0.1ml
fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又称:纤维介素蛋白;前凝血素)Multi-class antibodies规格: 0.5mg
BetaGAL(Human Alpha-galactosidase) ELISA Kit 人β半乳糖苷酶Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-NKA 神经激肽A抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-13Ra1 白细胞介素-13受体a1抗体 规格 0.1ml
BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides) ELISA Kit 小鼠脑肠肽 96T
phospho-PARK2(Ser101) 英文名称: 磷酸化帕金蛋白抗体 0.1ml
Complement C3 英文名称: 补体C3a过敏毒素抗体 0.1ml
Anti-NKA 神经激肽A抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml