大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞是大肠杆菌 BL21（DE3）plysS 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的热击转化。使用 pUC19 质粒检测本产品，转化效率可达 107。该菌株带有质粒plysS，具有氯霉素抗性，此质粒含有表达 T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达

产品及特点

大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测，
本产品转化效率可达 107CFU/μg。
DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本
Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。
辅助质粒包含 tns ABCD 区域，该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶
位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）
含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和 Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒
多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac
的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组 Bacmid，提取纯化重组
Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac 细胞中的
The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组 bacmid
的蓝白斑筛选。

菌株基因型为：F
- mcrA Δ(mrr
-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1
endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-
rpsL nupG/pMON14272/pMON7124
规格及成分 成分 编号 包装
本产品 140576 0.1 mL×10
使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。
自备试剂 重组质粒、SOC 或 LB 培养基等
大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞使用方法 1. 制备含 有如 下抗生 素的 LB 固 体平板 ：50 μ g/mL Kanamycin ，7 μ g/mL
gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据
实际情况分装使用。
以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹
打混匀，冰浴 30 分钟。
4. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床，
200rpm 振荡培养 4 小时。
6. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释，如分成 3 个稀释梯度 10-1
,10-2
,10-3。
7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体*吸收后，倒置平板，
37℃培养 24-48 小时。
8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。
注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再
涂布新培养基进行培养。