人微管相關(guān)蛋白2（MAP-2）Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

【產(chǎn)品名稱】

通用名：人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)Elisa試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【包裝規(guī)格】 96T/盒

【預(yù)期用途】 禽流感（Avian influenza，AI）是目前危害國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)的一種急性接觸性病毒性傳染病。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感發(fā)生的zui有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。

   人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)Elisa試劑盒適用于不同品種、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測?？捎糜谇萘鞲校ㄈ《荆┮呙缑庖咝Чu價、免疫時間的確定分析、地區(qū)雞群禽流感免疫狀況評價等。

【原    理】

本試劑盒系由預(yù)包被禽流感病毒（AIV）重組抗原的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中禽流感病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽流感病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。

【儲存及有效期】

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為1個月。

【試劑盒組成】

1.

禽流感病毒抗原預(yù)包被微孔板條

96T×1

2.

酶標(biāo)記物  (紅蓋)

11ml×1

3.

樣品稀釋液  (黃蓋)

50ml×1

4.

20X濃縮洗滌液  (透明蓋)

40ml×1

5.

底物液A  (白蓋)

7ml×1

6.

底物液B  (黑蓋)

7ml×1

7.

終止液  (黃蓋)

7ml×1

8.

陽性對照 (紅蓋，已滅活)

0.5 ml×1

9.

陰性對照 (綠蓋，已滅活)

0.5 ml×1

10.

蓋板膜

1張

11.

自封袋

1個

12.

說明書

1份

【樣品制備】  取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品短期可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

【樣品稀釋】  用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如5μl血清加入495μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)Elisa試劑盒試驗(yàn)操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量微孔板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰性/陽性對照孔分別加入陰性/陽性對照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）。

【結(jié)果判定】

1.陰性對照：正常情況下，陰性對照孔A值≤0.10；

2.陽性對照：正常情況下，陽性對照孔A值≥0.6；

3.臨界值（C.O）的計算：C.O=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）；

4.結(jié)果判定：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。

【人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。