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正常細(xì)胞常規(guī)核型的標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)
閱讀：272 發(fā)布時(shí)間：2019-2-15| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.4KB |
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| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 272次 |
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實(shí)驗(yàn)方法原理 采用微量全血培養(yǎng)人體外周血中淋巴細(xì)胞，在淋巴母細(xì)胞分裂高峰時(shí)加入秋水仙素，破壞細(xì)胞紡錘體的形成，使細(xì)胞停止在分裂中期。然后收集細(xì)胞，低滲處理，使細(xì)胞脹大，染色體伸展。接著進(jìn)行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質(zhì)，使染色體清晰且分散良好。再結(jié)合離心技術(shù)去掉紅細(xì)胞碎片，然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標(biāo)本。
實(shí)驗(yàn)材料 外周血
試劑、試劑盒 640培養(yǎng)液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶EDTAPHAKCl甲醇冰醋酸Giemsa原液磷酸緩沖液生理鹽水
儀器、耗材 超凈臺鑷子離心機(jī)水浴箱天平離心管顯微鏡載玻片平皿
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。
2. 洗手、換潔凈白大衣后進(jìn)入操作室。啟動(dòng)超凈臺，點(diǎn)燃煤氣燈。
3. 用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面，然后將培養(yǎng)液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
4. 在超凈臺內(nèi)將每個(gè)培養(yǎng)瓶裝入5 ml 培養(yǎng)液及0.2 ml PHA溶液，封好備用。
5. 用5 ml 注射器，7號針頭，先吸取少許肝素濕潤針筒，然后從肘靜脈抽血1~2 ml。
6. 每個(gè)培養(yǎng)瓶接種全血0.2 ml 左右輕輕搖動(dòng)使血和培養(yǎng)液混勻。
7. 在培養(yǎng)瓶上標(biāo)記好供血者姓名、性別、采血日期等，放入培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。
8. 每天輕輕震蕩培養(yǎng)瓶二、三次，防止血球沉積并保證血細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，促進(jìn)細(xì)胞生長繁殖。
收起
注意事項(xiàng)
試劑配方
500 單位／ml 的肝素溶液
10μg／ml 的秋水仙素溶液
0.25％胰蛋白酶一 0.02％EDTA 混合消化液
0.5mg／ml 的 PHA 溶液
0.075mol／L 的 KCl 溶液
磷酸緩沖液（pH6.8）
其他
1.人體外周血中淋巴細(xì)胞是成熟的免疫細(xì)胞，正常情況下處于 G。期不再增殖。PHA（Phytohemagglutinin，植物血凝素）是人和其它動(dòng)物淋巴細(xì)胞的有絲分裂刺激劑，它能使處于 G0 期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞周期開始旺盛的有絲分裂。
2.人體染色體常規(guī)核型的分析，在今天的染色體研究水平上作為染色體結(jié)構(gòu)異常的疾病診斷已經(jīng)失去意義，但對染色體數(shù)目異常仍具有診斷上的價(jià)值，尤其是起著分析其它幾種顯帶核型的橋梁作用。通過常規(guī)核型的分析必須掌握三點(diǎn)：（1）會(huì)分組；（2）了解各組染色體的基本形態(tài)特征；（3）會(huì)計(jì)數(shù)數(shù)目和鑒定性別。