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16HBE 人支氣管上皮細胞
閱讀：286 發(fā)布時間：2018-8-6| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 175.3KB |
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16HBE 人支氣管上皮細胞 使用說明書
支氣管上 皮 貼壁
所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護
培養(yǎng)基：美國sciencell 角質(zhì)細胞培養(yǎng)基，貨號： 2101
溫度：37℃
氣相：95%空氣，5%二氧化碳
收到細胞后，請對細胞培養(yǎng)瓶外表進行消毒，將細胞置于培養(yǎng)箱中進行 1-2 小時的緩沖，待細胞恢復基本生長狀態(tài)后，進行后續(xù)細胞實驗。
在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
（一）細胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
（二）細胞已長滿（達 85-95%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞回縮變圓、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入雙倍的含 10%血清的*培養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液，
3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細胞彈散，
4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞，進行傳代、凍存，
5.如果沒有特別說明，建議收到細胞后的次傳代比例為 1:2。
注：1.觀察細胞密度用（4X 物鏡）低倍鏡觀
察，以便正確的判斷細胞密度；觀察細胞形態(tài)請用
（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2.瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；
3.有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內(nèi)；
4.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們聯(lián)系。
凍存條件：70%基礎培養(yǎng)液+20%胎牛血清
+10%DMSO
保存條件：液氮存儲
經(jīng)供研究之用
1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
2.細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時后觀察， 如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度 85-95%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁， 將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。