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人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）培養(yǎng)
閱讀：304 發(fā)布時間：2018-8-2| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 225.7KB |
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人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）培養(yǎng)
1 ). 將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存。
（注：4℃下多貯存24小時，室溫下不超過6小時，否則廢棄）
2 ). 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的PBS溶液沖洗3-5次，將污血沖洗干凈為止。
3 ). 用手術鉗夾緊臍帶下端，加入15ml 的膠原酶（1mg/ml）室溫下消化15-20分鐘，并不時上下?lián)u動臍帶。
4 ). 消化完后，將下端手術鉗松開，消化液流入一個50 ml無菌離心管中，用無菌的PBS溶液沖洗臍帶2-3次。
5 ).將收集液離心（2000轉/分）3分鐘。
6 ).倒去上清，加入10ml M199培養(yǎng)基（加入10U/ml的bFGF），用彎管吹散細胞，將所有液體轉入一個用明膠包被好的培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng)。
（注：每個培養(yǎng)瓶中加入3-4ml無菌的1%的明膠溶液，搖勻使得明膠溶液*鋪滿瓶底，放入37℃孵育，少2小時，用前將明膠溶液倒了即可，明膠包被有利于細胞貼壁。）
7 ). 培養(yǎng)24小時后，倒掉培養(yǎng)基，并用無菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉紅細胞和死細胞，加入10 ml新鮮的 M199培養(yǎng)基。
8 ). 以后每2天換一次培養(yǎng)基（每次換掉2/3的培養(yǎng)基）。
9 ).一般培養(yǎng)5-7天，細胞可長滿至80-90%單層，這時可以傳代。
10 ).倒掉培養(yǎng)基，用無菌的PBS溶液清洗2-3次，加入2-3ml消化液（0.25%胰酶+0.1%EDTA）消化細胞，在顯微鏡下觀察，一旦細胞變圓，即加入2-3倍的有血清的DMEM培養(yǎng)基終止反應。
11 ).用彎管將細胞吹打下來，并將所消化的細胞轉移到一個50 ml無菌離心管中，2000轉/分，離心3分鐘。
12 ).倒掉上清,加入10ml新鮮培基,一般一瓶細胞可傳代3-4瓶.以后照此傳代培養(yǎng).
一般傳代2-3代（培養(yǎng)了20天左右）用于做各種實驗效果。