化工仪器网
技术文章
丁酸(butyric acid)竞争法ELISA试剂盒使用流程？？？
阅读：219 发布时间：2024-8-26本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定样本中丁酸(butyric acid)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中丁酸(butyric acid)水平。用纯化的丁酸(butyric acid)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入丁酸(butyric acid)，和HRP标记的丁酸(butyric acid)抗原，使它们竞争结合，，经过洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的丁酸(butyric acid)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中丁酸(butyric acid)的含量。
试剂盒组成
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 |
8 | 标准品S1（480ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 标准品S2（240ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3（120ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S4（60ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5（30ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 终止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 说明书 | 1份 |
7 | 样品稀释液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2张 |
标本要求
1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查
（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，备查
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
检测范围：
10 ng/L -550ng/L
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月