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游離脂肪酸含量測試盒
閱讀：258 發(fā)布時間：2020-11-12
游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌
功能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。
測定原理：
在弱酸性條件下，F(xiàn)FA 與銅鹽反應生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游
離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。
樣品中 FFA 提取：
1、 血液：將所取血液，室溫靜置 1 h 后，于 4 ℃ 離心機 3500 rpm 離心 15min，取上清 0.1mL，
加 1mL 試劑一，震蕩提取 3h，8000g，4℃離心 10min，取上清液待測。
2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后稱取約 0.1g 轉(zhuǎn)移至離
心管，按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例加入試劑一，震蕩提取 3h，
8000g，4℃離心 10min，取上清液待測。
3、 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲
2 秒，間隔 3 秒，總時間 3min）；震蕩提取 3h，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清
待測。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 715 nm。
2. 空白管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，調(diào)零。
3. 測定管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，測定吸光值，記為 A。
FFA 含量計算：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量計算
FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA 含量計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
FFA（nmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=133×(A-0.0055)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算
FFA（nmol/104
cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)
=133×(A-0.0055)÷細胞數(shù)量
V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 反總：反應總體積，0.4mL；V 樣：加入樣本體積，0.4mL；
W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
b.使用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0038 x+ 0.0055，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量計算
FFA（nmol/mL）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷V 樣= 2666×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA 含量計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol /mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣×Cpr)
= 266×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
FFA（nmol /g）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
= 266×(A-0.0055)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算
FFA（nmol /104
cell）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)量)
=266×(A-0.0055)÷細胞數(shù)量
V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 反總：反應總體積，0.4mL；V 樣：加入樣本體積，0.4mL；
W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項：
1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公
司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒。
2. di檢出限為 0.8 mmol/L。