葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PDH）是一種位于細(xì)胞質(zhì)中的酶，屬于磷酸戊糖途徑，通過維持輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平為細(xì)胞提供還原能量。G6PDH在氧化葡萄糖-6-磷酸（G6P）的同時(shí)，將煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）還原為NADPH。人類如果遺傳性缺乏G6PDH，容易患非免疫性溶血性貧血。BioAssay Systems的非放射性比色法G6PDH檢測基于NADPH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，將四氮唑鹽MTT還原為在565 nm處具有最大吸收峰的還原型MTT。565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems銷售產(chǎn)品葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點(diǎn)

- 快速靈敏。線性檢測范圍（20 L樣本）：15分鐘反應(yīng)為0.2至100 U/L。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測?？稍诟咄亢Y選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

應(yīng)用

用于測定生物樣本（如血漿、血清、紅細(xì)胞、組織和培養(yǎng)基）中的G6PDH活性。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 檢測緩沖液：10 mL

- 二氫硫色素：120 L

- NADP/MTT溶液：1 mL

- 校準(zhǔn)液：1.5 mL

- 底物：1 mL

儲存條件

試劑盒在常溫下運(yùn)輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)需遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。詳細(xì)信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測基于動力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時(shí)間一致，加入工作試劑時(shí)需迅速，混合需短暫但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度下進(jìn)行（例如25°C或37°C）。

樣本準(zhǔn)備

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將50 mg組織在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 細(xì)胞裂解液：通過在4°C下以2,000 × g離心5分鐘收集細(xì)胞。對于貼壁細(xì)胞，不要使用蛋白酶酶收獲細(xì)胞，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當(dāng)體積中勻漿或超聲處理細(xì)胞。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個(gè)月。

試劑準(zhǔn)備

將試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C或37°C）。使用前短暫離心試管。按每孔計(jì)算，將8 L底物、8 L NADP/MTT溶液、1 L二氫硫色素和70 L檢測緩沖液混合，制備足夠所有檢測孔的工作試劑（WR）。

反應(yīng)準(zhǔn)備

1. 將100 L H?O（ODH?O）和100 L校準(zhǔn)液（ODCAL）溶液分別加入透明平底96孔板的孔中。

2. 將每個(gè)樣本的20 L分別加入不同的孔中，然后向每個(gè)樣本孔中加入80 L WR。輕輕敲擊孔板以混合。

3. 在酶標(biāo)儀上讀取565 nm處的吸光度（OD?），15分鐘后再次讀?。∣D??）。

所需材料（但未提供）

移液裝置及配件（如多通道移液器）、透明平底96孔板（如VWR貨號82050-760）、離心管和酶標(biāo)儀。

實(shí)驗(yàn)示例

文獻(xiàn)：

1. Glock, GE and McLean, P (1953) Further Studies on the Properties and Assay of Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase and 6-Phosphogluconate Dehydrogenase of Rat Liver. Biochem. 55:400-8.

2. Kirman, HN and Hendrickson, EM (1962) Glucose 6-Phosphate Dehydrogenase from Human Erythrocytes II. Subactive states of the enzyme from normal persons. J. Biol. Chem. 237: 2371-6.

3. Tian, W-N et. al. (1998) Importance of Glucose-6-phosphate Dehydrogenase Activity for Cell Growth. J. Biol. Chem. 273: 10609-17.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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