DNA 中的 5 - 甲基胞嘧啶（5 - mC）是由 DNA 甲基转移酶在胞嘧啶环的 5 - 碳上共价添加甲基基团形成的。这一过程已得到充分研究，通常与基因表达的抑制相关。研究表明，在人类中，5 - mC 还存在于多种 RNA 分子中，包括 tRNA、rRNA、mRNA 和非编码 RNA（ncRNA）。5 - mC 在某些类别的 ncRNA 中似乎较为富集，但在 mRNA 中相对较少。动物基因组中 5 - mC 的含量变化较大，从一些昆虫中检测不到的量到人类细胞中约占总 RNA 的 0.1 - 0.45%。研究发现，大多数（83%）的 5 - mC 位点存在于 mRNA 中。在这些转录本中，5 - mC 在蛋白编码序列中相对较少，但在 5' 和 3' 非翻译区（UTR）中较为富集。已知两种不同的甲基转移酶，NSUN2 和 Dnmt2，在真核生物 RNA 中催化 5 - mC 的修饰。有大量证据表明，RNA 胞嘧啶甲基化会影响多种生物学过程的调控，例如 RNA 稳定性和 mRNA 翻译。此外，vault RNA 中 5 - mC 的缺失会导致异常加工成与 Argonaute 相关的小 RNA 片段，这些片段可作为 microRNA 功能化。因此，vault ncRNA 的受损加工可能有助于与 NSUN2 缺乏相关的某些人类疾病的发病机制。

MethylFlash™ 5 - mC RNA 甲基化 ELISA 简易试剂盒（荧光法）是一套经过优化的缓冲液和试剂，用于定量检测从任何物种（包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）中分离的总 RNA 的全球 5 - 甲基胞嘧啶（5 - mC）RNA 甲基化水平，这些物种包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织、血浆 / 血清样本和体液样本等。该试剂盒基于我们流行的 MethylFlash™ 定量技术。

艾美捷MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA Easy试剂盒（荧光法）（#P-9009-48）优势与特点：

快速 —— 整个操作流程只需 2 小时 40 分钟。

稳健 —— 试剂盒成分使检测具有较大的“信号窗口"，且重复性差异较小。

方便 —— 本身背景噪音低，从而无需进行板阻断步骤。

灵敏 —— 检测限可低至从 200 ng 输入 RNA 中的 0.02% 的 5 - mC RNA。

特异 —— 对 5 - mC 具有高特异性，在指定样本 RNA 浓度范围内，对未甲基化的胞嘧啶或羟甲基化的胞嘧啶无交叉反应。

通用 —— 正负对照允许检测任何物种的 5 - mC RNA 甲基化。

准确 —— 优化的正对照可按百分比进行分级，使检测结果更准确，与 HPLC - MS 分析高度可比。

灵活 —— 条带式微孔板格式使检测既适用于手动操作，也适用于高通量分析。

原理与操作流程：

该试剂盒包含用于定量检测全球 5 - mC RNA 甲基化的所有试剂。在检测过程中，RNA 会结合到经过特殊处理具有高核酸亲和力的条带孔中。使用捕获和检测抗体检测 RNA 中的 5 - mC，然后通过在微孔板分光光度计中读取荧光强度来定量检测。5 - mC RNA 的百分比与测量到的荧光强度成正比。

数据分析：

左图：是使用 5 - mC 标准对照生成的典型标准曲线示例。

右图：使用 MethylFlash™ 5 - mC RNA 甲基化 ELISA 简易试剂盒（荧光法）对不同物种的各种 RNA 样本中的 5 - mC 含量进行准确定量。结果与 MS - LC 获得的结果密切相关。