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Cy3最大激發(fā)光波長為570nm,最大發(fā)射光波長為650nm,呈綠色熒光。但是在綠光光譜波長激發(fā)下,Cy3也可出現(xiàn)紅色熒光。Cy3屬于花菁類染料 (Cyanine Dyes),常見的Cy系列染料主要包括有Cy2、Cy3、Cy5等,能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合。這類染料的熒光特性與傳統(tǒng)熒光素類似,但水溶性和對光穩(wěn)定性 較強,熒光量子產(chǎn)率較高,對pH等環(huán)境不敏感。常用于多重染色。Cy3在氬光燈(514nm或528nm)下可以被激發(fā)出50%的光強,在氦氖燈 (543nm)或者汞燈(546nm)下則約75%的光強。 Cy3可以和熒光素一起作雙標(biāo)。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實驗中作多標(biāo)記。Cy3和Cy5比其他的熒光團探針要更亮,更穩(wěn)定,背景更弱。因 為激發(fā)光和發(fā)射光波長很接近TRITC,在熒光顯微鏡中,可使用和TRITC一樣的濾波片。
艾美捷Cy3標(biāo)記親和純化山羊抗小鼠IgG(H+L)二抗:
貨號:115-165-003
靶標(biāo):小鼠
宿主:山羊
抗體形式:全IgG
特異性:IgG(H+L)
偶聯(lián)物:Cyanine Cy™3
產(chǎn)品類別:全IgG親和純化抗體
克隆性:多克隆
物理狀態(tài):凍干固體
儲存與復(fù)溶:凍干固體應(yīng)于2-8°C下保存。使用標(biāo)示體積的去離子水復(fù)溶,如有渾濁可離心澄清。使用當(dāng)天制備工作濃度。產(chǎn)品在2-8°C下作為未稀釋液體可穩(wěn)定保存約6周。
復(fù)溶后的長期儲存:分裝后于-70°C或更低溫度下冷凍保存。避免反復(fù)凍融?;蛘?,加入等體積的甘油(ACS級或更優(yōu)),使最終濃度達(dá)到50%,并以液體形式在-20°C下保存。
有效期:自復(fù)溶之日起一年。如果測試結(jié)果符合預(yù)期用途,有效期可以延長。
純度:抗體通過免疫親和色譜法從抗血清中純化,使用與瓊脂糖珠偶聯(lián)的抗原進行純化。
緩沖液:0.01M磷酸鈉、0.25M氯化鈉,pH 7.6
穩(wěn)定劑:15 mg/ml牛血清白蛋白(無IgG、無蛋白酶)
防腐劑:0.05%疊d化鈉
建議的工作濃度或稀釋范圍:大多數(shù)應(yīng)用為1:100 - 1:800
稀釋因子以范圍形式給出,因為最佳稀釋度是多種因素的函數(shù),例如抗原密度、通透性等。實際使用的稀釋度必須通過實驗確定。
Cyanine Cy™3
最大吸收波長(Amax):550 nm
最大發(fā)射波長(Emax):570 nm
Cy3比其他橙紅色熒光染料偶聯(lián)物更亮、更耐光,且背景更低。Cy3偶聯(lián)物在550 nm處吸收光強,發(fā)射峰在570 nm。在熒光顯微鏡下,Cy3可以使用傳統(tǒng)的四甲基羅丹明(TRITC)濾光片組進行觀察,因為其激發(fā)和發(fā)射光譜與TRITC幾乎w全相同。我們推薦Cy3作為比TRITC更亮的替代品。Cy3可以用氬激光(514 nm或528 nm線)激發(fā)到最大值的約50%,或者用氦氖激光(543 nm線)或汞燈(546 nm線)激發(fā)到最大值的約75%。Cy3已用于與熒光素進行雙重標(biāo)記;然而,建議使用窄帶通發(fā)射濾光片來最小化FITC濾光片組中的Cy3熒光。在共聚焦顯微鏡下進行多重標(biāo)記時,Cy3也可以與Alexa Fluor 647配對使用。然而,對于多重標(biāo)記,更好的選擇是羅丹明Red-X,因為它的熒光介于綠色熒光染料(如Alexa Fluor 488)和遠(yuǎn)紅色熒光染料(如Alexa Fluor 647)之間。
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