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辣根過(guò)氧化物酶HRP標(biāo)記親和純化山羊抗人IgG(H+L)二抗:親和純化,高靈敏度

時(shí)間:2025/6/4閱讀:29
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HRPHorseradish Peroxidase,辣根過(guò)氧化物酶)是一種分子量達(dá)44000的糖蛋白,由無(wú)色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結(jié)合而成,通常來(lái)源于辣根植物中,是臨床檢驗(yàn)試劑中的常用酶。辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以常用。HRP廣泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋 白,糖含量18%。由于其易于提取、價(jià)格相對(duì)低廉,同時(shí)性質(zhì)穩(wěn)定,耐熱及有機(jī)溶劑的作用,與抗原或抗體偶聯(lián)后,活性很少受損失,因此是迄今為止在免疫學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的一種標(biāo)記用酶。HRP的催化底物包括色原底物、化學(xué)發(fā)光底物等,其中常用的色原底物有鄰苯二胺(OPD)、22-吖嗪-3-乙酰苯 基噻唑磺酸-6)(ABTS)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和4-氨基安替比林:苯酚耦聯(lián)底物對(duì)等;而化學(xué)發(fā)光底物則包括Luminol/增強(qiáng)劑等系統(tǒng)。

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艾美捷辣根過(guò)氧化物酶HRP標(biāo)記親和純化山羊抗人IgG(H+L)二抗

貨號(hào):109-035-003

物理狀態(tài):凍干固體

純度:抗體通過(guò)免疫親和層析從抗血清中純化,使用與瓊脂糖珠偶聯(lián)的抗原進(jìn)行純化。

緩沖液:0.01M 磷酸鈉,0.25M 氯化鈉,pH 7.6

穩(wěn)定劑:15 mg/ml 牛血清白蛋白(無(wú)IgG,無(wú)蛋白酶)

防腐劑:無(wú)(警告:使用疊d化鈉作為防腐劑將顯著抑制辣根過(guò)氧化物酶的酶活性。)

免疫原:人IgG

來(lái)源宿主:山羊

 

建議的工作濃度或稀釋范圍:

免疫組織化學(xué)/細(xì)胞化學(xué):1:500 - 1:5,000

使用比色底物的ELISAWestern blot1:5,000 - 1:100,000

使用ECL底物的Western blot1:10,000 - 1:200,000

 

稀釋因子以范圍形式呈現(xiàn),因?yàn)樽罴严♂尪仁嵌喾N因素的函數(shù),例如抗原密度、通透性等。實(shí)際使用的稀釋度必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。

偶聯(lián)物:辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP

辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物是通過(guò)改良的NakaneKawaoi方法制備的(《組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志》1974年,第22卷,第1084頁(yè))。過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物常用于免疫組織化學(xué)、Western blotELISA??捎糜跈z測(cè)辣根過(guò)氧化物酶抗原或放大含有HRP的試劑信號(hào)的抗辣根過(guò)氧化物酶及其偶聯(lián)物。對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的免疫染色,使用抗辣根過(guò)氧化物酶的一個(gè)優(yōu)勢(shì)是背景較低,因?yàn)樵摽贵w不會(huì)識(shí)別這些細(xì)胞中存在的內(nèi)源性類過(guò)氧化物酶。

反應(yīng)性:該山羊抗人二抗與人IgG分子有特異性反應(yīng),與其它人免疫球蛋白(包括IgM、IgEIgD、IgA等)的輕鏈有交叉反應(yīng)。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無(wú)交叉反應(yīng),但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應(yīng)。

儲(chǔ)存與復(fù)溶:將凍干固體儲(chǔ)存在2-8°C。按照產(chǎn)品說(shuō)明書指示的體積用去離子水復(fù)溶,如果溶液不澄清,可以離心。在使用當(dāng)天準(zhǔn)備工作液。產(chǎn)品作為未稀釋的液體在2-8°C下可穩(wěn)定保存約6周。

長(zhǎng)期儲(chǔ)存:復(fù)溶后,分裝并置于-70°C或更低溫度下冷凍保存。避免反復(fù)凍融?;蛘?,加入等體積的甘油(ACS級(jí)或更優(yōu)),使最終濃度達(dá)到50%,并以液體形式在-20°C下保存。

有效期:從復(fù)溶日期起一年。如果測(cè)試結(jié)果符合預(yù)期用途,有效期可以延長(zhǎng)。  


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