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淺析細胞體外培養(yǎng)
細胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種，是從動物體內(nèi)取出細胞，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適溫、豐富的營養(yǎng)條件下，使離體細胞生存、生長并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。細胞實驗是科學(xué)探究的基礎(chǔ)，細胞實驗服務(wù)可以提供包括細胞侵襲檢測、細胞劃痕檢測以及細胞增殖實驗等的研究。細胞體外培養(yǎng)實驗對于科學(xué)研究至關(guān)重要，然而在細胞培養(yǎng)中，常會因為不適宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細胞被污染。在細胞培養(yǎng)實驗中如何避免污染是一項很重要的工作，現(xiàn)在我們來看一下細胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類，以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中應(yīng)注意實驗室內(nèi)空氣保持潔凈，定期清掃、紫外消毒，操作者嚴格按照無菌操作進行。由于離體細胞對各種毒物都很敏感，所以細胞培養(yǎng)所用器材的清洗、消毒處理非常關(guān)鍵。
培養(yǎng)所用的物品器具要*清洗消毒，超凈臺的物品擺放要井然有序，避免反復(fù)燒烤已經(jīng)高溫滅菌的物品以及避免因細胞株種類過多而引起的細胞間交叉污染。細胞實驗室的構(gòu)建也是各個細胞實驗服務(wù)公司*的實驗室，實驗室需要配備CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺/生物安全柜、純水系統(tǒng)以及液氮罐等設(shè)備，同時需要保證細胞實驗室的干凈與整潔。
2、支原體污染
支原體是一種沒有細胞壁的原核生物，大多呈不規(guī)則球狀或絲狀，由于它的直徑?。s為0.15-2 µm），而且形狀靈活，所以能逃過實驗室常用的濾膜。在光學(xué)顯微鏡下支原體不可見，對培養(yǎng)基的需求有限，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此支原體慢慢的殺細胞于無形之中。細胞被支原體污染后，其生長繁殖和形態(tài)、代謝及功能、染色體及免疫細胞產(chǎn)量均會受到影響，支原體污染能夠消耗營養(yǎng)物，促進代謝積累，導(dǎo)致PH改變，誘導(dǎo)或抑制細胞因子表達，并改變培養(yǎng)細胞的代謝、增殖特征以及形態(tài)。
據(jù)一些資料報道，支原體污染在細胞體外培養(yǎng)過程中發(fā)生率高達15%~80%。為了避免支原體污染的發(fā)生，對培養(yǎng)物進行常規(guī)的支原體檢測非常重要，應(yīng)嚴格按照細胞培養(yǎng)操作程序進行操作、確保適宜的環(huán)境條件、嚴格的無菌觀念操作、定期清潔消毒、任何培養(yǎng)用液使用前均進行無菌檢查、只引進來源可靠的細胞，同時一旦發(fā)現(xiàn)污染的細胞應(yīng)滅活棄之避免進一步污染擴散。美迪西提供細胞實驗服務(wù)，其生物部在分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗。從初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計，通過蛋白質(zhì)純化，結(jié)構(gòu)測定和分析測定，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。
3、霉菌污染
霉菌污染也是細胞培養(yǎng)過程中常見的一個問題，如果細胞被霉菌污染后，在低倍鏡下可見乳白色的團狀漂浮物，培養(yǎng)液無變化。高倍鏡下可見明顯的菌絲，細胞活力變差，生長速度明顯變慢，甚至死亡。細胞被霉菌污染時，若非價值很高的珍貴細胞一般選擇扔掉，且相關(guān)的容器也要做嚴格處理。有文獻報道，低速離心法可去除細胞培養(yǎng)中的霉菌污染，不僅實驗條件簡單，能*去除霉菌，且所用時間短．并能將不良反應(yīng)降至低程度。
細胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類除了上述之外，還有真菌、病毒原蟲等污染，不管是何種類型的污染，總之在細胞體外培養(yǎng)實驗中，預(yù)防污染的方法是良好的細胞培養(yǎng)技巧和正確的態(tài)度。同時在體外細胞培養(yǎng)時，還需要主動避免細胞實驗對人的影響。實驗人員需要注意一些操作細節(jié)．如避免由于眼睛及皮膚長時間暴露在紫外線下造成的損傷，同時避免由于誤照引起的電光性眼炎。紫外線燈在消毒時可產(chǎn)生刺激人體呼吸道黏膜的臭氧，臭氧過多時也會引起中毒反應(yīng)，所以為避免損傷出現(xiàn)應(yīng)使用無臭氧紫外線燈或在消毒完30分鐘后再進入超凈工作室操作。