CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒技術(shù)詳解

時(shí)間：2025-6-18閱讀：59

CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒技術(shù)文章

（一）產(chǎn)品概述

CCK-8（Cell Counting Kit-8）細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒是一種基于 WST-8（水溶性四唑鹽）的高靈敏度、便捷的細(xì)胞活力檢測(cè)工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細(xì)胞培養(yǎng)基、陽(yáng)性對(duì)照品等組分。其中，CCK-8 溶液是核心試劑，WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，可被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物，該產(chǎn)物的生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比，通過(guò)測(cè)定其在特定波長(zhǎng)下的吸光度，即可準(zhǔn)確反映細(xì)胞活力。

（二）技術(shù)原理

CCK-8 檢測(cè)的原理基于細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活性。當(dāng) CCK-8 溶液加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)體系中時(shí)，WST-8 可穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)?；罴?xì)胞中的線粒體脫氫酶能夠?qū)?WST-8 還原為橙黃色的甲臜，而死細(xì)胞由于缺乏活性的脫氫酶，無(wú)法進(jìn)行該還原反應(yīng)。在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定甲臜產(chǎn)物的吸光度，其吸光度值與活細(xì)胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可根據(jù)吸光度值準(zhǔn)確計(jì)算出細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比，CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好，無(wú)需裂解細(xì)胞，避免了操作過(guò)程中因細(xì)胞裂解不等因素導(dǎo)致的誤差，使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

（三）應(yīng)用領(lǐng)域與實(shí)際案例

藥物研發(fā)：在新藥篩選和藥物毒性評(píng)估中，CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒被廣泛應(yīng)用。例如，在抗腫瘤藥物研發(fā)過(guò)程中，科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細(xì)胞系，一定時(shí)間后加入 CCK-8 溶液檢測(cè)細(xì)胞活力。通過(guò)計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），評(píng)估藥物的抗腫瘤活性和毒性，為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持，篩選出具有潛力的候選藥物。

細(xì)胞生物學(xué)研究：在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)研究中，該試劑盒用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞狀態(tài)。如在干細(xì)胞分化研究中，使用 CCK-8 檢測(cè)不同誘導(dǎo)條件下干細(xì)胞的活力變化，判斷細(xì)胞是否成功分化以及分化過(guò)程中細(xì)胞活力的動(dòng)態(tài)變化，為揭示細(xì)胞分化機(jī)制提供依據(jù) 。

毒理學(xué)研究：在評(píng)估化學(xué)物質(zhì)、環(huán)境污染物等對(duì)細(xì)胞的毒性作用時(shí)，CCK-8 法是常用的檢測(cè)手段。例如，檢測(cè)重金屬離子對(duì)肝細(xì)胞的毒性，將肝細(xì)胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中，利用 CCK-8 試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力，確定重金屬的毒性劑量和作用機(jī)制，為環(huán)境安全評(píng)估和毒理學(xué)研究提供數(shù)據(jù)。

（四）使用方法與注意事項(xiàng)

使用方法

細(xì)胞接種：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化后，用培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度，接種到 96 孔板中，每孔加入適量細(xì)胞懸液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

藥物處理（如需）：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模蚩字屑尤氩煌瑵舛鹊乃幬锘蛱幚硪蛩?，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間。

CCK-8 檢測(cè)：向每孔加入適量 CCK-8 溶液，輕輕混勻后，將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(shí)（具體時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件確定）。

吸光度測(cè)定：使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。

注意事項(xiàng)

試劑儲(chǔ)存：CCK-8 試劑盒應(yīng)避光保存于 4℃冰箱，避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響試劑活性。

操作規(guī)范：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免污染。加入 CCK-8 溶液時(shí)，避免產(chǎn)生氣泡，以免影響吸光度測(cè)定。

干擾因素：某些具有還原性的物質(zhì)可能會(huì)與 WST-8 發(fā)生反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)前需評(píng)估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì)，并進(jìn)行相應(yīng)處理。

對(duì)照設(shè)置：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照（只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液）、陰性對(duì)照（正常培養(yǎng)的細(xì)胞）和陽(yáng)性對(duì)照（已知具有細(xì)胞毒性或促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)作用的物質(zhì)處理的細(xì)胞），確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒憑借其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，在生物技術(shù)多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，其應(yīng)用場(chǎng)景將進(jìn)一步拓展，同時(shí)也將推動(dòng)相關(guān)技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化。

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