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不同類型的指示劑在SDS-PAGE電泳中的遷移情況有何差異?
溴酚藍
遷移速度:溴酚藍的分子量較小,在 SDS - PAGE 電泳中遷移速度較快。通常在 10% - 12% 的聚丙烯酰胺凝膠中,它的遷移位置大致相當于 3 - 5 kDa 的蛋白質(zhì)。
顏色變化:溴酚藍在堿性條件下呈藍色,在酸性條件下呈黃色。在電泳過程中,由于凝膠環(huán)境通常為堿性,所以它一直保持藍色,便于觀察電泳的進程。
二甲苯青 FF
遷移速度:二甲苯青 FF 的分子量比溴酚藍大,遷移速度較慢。在相同濃度的聚丙烯酰胺凝膠中,它的遷移位置大約相當于 40 - 50 kDa 的蛋白質(zhì)。
顏色變化:二甲苯青 FF 通常呈現(xiàn)藍色,在電泳過程中顏色相對穩(wěn)定,也是通過其在凝膠中的位置來指示電泳的進度。
銀染指示劑
遷移速度:銀染指示劑并非傳統(tǒng)意義上在電泳過程中實時觀察的指示劑,而是用于在銀染步驟中幫助判斷染色和脫色程度。它一般與蛋白質(zhì)樣品一起電泳,但在電泳過程中其遷移情況并不作為實時監(jiān)測指標。
顏色變化:在銀染過程中,銀染指示劑會與銀離子發(fā)生反應,通常會先于蛋白質(zhì)條帶顯色,幫助實驗者判斷染色時間。在脫色過程中,它也會先于蛋白質(zhì)條帶褪色,可作為脫色終止的參考,其顏色變化從深色(如棕色或黑色)逐漸變?yōu)闊o色。
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