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凝膠滲透色譜的操作流程注意細節(jié)

閱讀:1233      發(fā)布時間:2025-2-10
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  凝膠滲透色譜是一種基于分子尺寸對聚合物進行分離和分析的技術,其使用流程主要包括以下幾個關鍵步驟:
  1. 前期準備
  - 樣品溶解:選取合適的溶劑將樣品充分溶解。溶劑不僅要能溶解多種聚合物,還不能腐蝕儀器部件,并且要與檢測器相匹配。對于一些難溶的樣品,可以采用加熱、攪拌或超聲等方法輔助溶解。
  - 樣品過濾:溶解后的樣品溶液需要用特定孔徑的濾膜進行過濾,以去除其中的雜質和不溶物,防止它們堵塞色譜柱或影響檢測結果。一般使用0.2μm或0.45μm的濾膜。
  - 儀器預熱:打開凝膠滲透色譜儀的電源,啟動泵系統(tǒng),讓流動相在系統(tǒng)中循環(huán)一段時間,使儀器達到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。同時,檢查儀器的各個部件是否正常工作,如檢測器、進樣器等。
  2. 參數(shù)設置
  - 流動相選擇與流速設定:根據(jù)樣品的性質和色譜柱的要求,選擇合適的流動相。常見的流動相有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等有機溶劑。然后,設置合適的流動相流速,一般在0.5-1.5ml/min之間。流速過快可能會影響分離效果,流速過慢則會延長分析時間。
  - 柱溫設定:不同的樣品和色譜柱可能需要不同的柱溫。一般來說,溫度越高,分子的運動越快,分離速度也會越快,但同時也會影響分子與固定相之間的相互作用。因此,需要根據(jù)具體情況選擇合適的柱溫,通常在20-60℃之間。
  - 檢測器參數(shù)設置:根據(jù)所使用的檢測器類型,設置相應的參數(shù)。例如,對于示差折光檢測器,需要設置靈敏度、衰減等參數(shù);對于紫外檢測器,需要設置檢測波長等參數(shù)。
  3. 樣品進樣
  - 手動進樣:如果儀器配備手動進樣器,先將進樣器的注射器吸取一定量的樣品溶液,一般為50-100μl,然后將注射器的針頭插入進樣口,緩慢注入樣品溶液,注意要避免產(chǎn)生氣泡和漏液。
  - 自動進樣:如果儀器配備自動進樣器,按照操作界面的提示,設置進樣的體積、速度等參數(shù),然后將樣品溶液放入自動進樣器的樣品盤中,儀器會自動完成進樣操作。
  4. 數(shù)據(jù)采集與分析
  - 基線穩(wěn)定:在樣品進入色譜柱之前,需要等待基線穩(wěn)定。基線是檢測器在沒有樣品通過時的響應信號,只有當基線平穩(wěn)后,才能開始采集數(shù)據(jù),以確保數(shù)據(jù)的準確性。
  - 數(shù)據(jù)采集:當樣品進入色譜柱后,檢測器會實時檢測到樣品中各組分的濃度變化,并將其轉化為電信號傳輸給數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)會記錄下每個時間點的檢測信號強度,形成色譜圖。
  - 數(shù)據(jù)分析:根據(jù)色譜圖,可以得到樣品中各組分的保留時間、峰面積、峰高等信息。利用這些信息,可以計算出樣品的分子量分布、平均分子量等參數(shù)。同時,還可以通過與標準樣品的色譜圖進行對比,對樣品中的未知組分進行定性分析。
  5. 儀器清洗與維護
  - 清洗色譜柱:分析結束后,需要用合適的溶劑對色譜柱進行清洗,以去除殘留的樣品和雜質。清洗的時間和流速可以根據(jù)具體情況進行調整,一般為30分鐘至數(shù)小時不等。
  - 關機:清洗完成后,關閉泵系統(tǒng)和檢測器的電源,然后按照儀器的操作規(guī)程關閉儀器的總電源。最后,對儀器進行清潔和維護,為下一次使用做好準備。

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