HSF95 Insect Cell Medium（CW003）昆虫细胞培养基产品说明书

一、产品基本信息

产品名称：HSF95 昆虫细胞培养基

产品货号：CW003

产品规格：1L

适用范围：sf9、High Five 等昆虫细胞悬浮培养及杆状病毒载体系统（BEVS）的重组蛋白瞬时表达

二、产品描述

CW003 培养基为无血清即用型全营养培养基，专为昆虫细胞悬浮培养设计，包含细胞生长所需的氨基酸、维生素、碳水化合物、微量元素及特殊促生长因子，无需额外添加血清或其他成分即可直接使用，适用于细胞驯化、高密度培养及工业化生产场景。

三、产品特点

1. 无血清配方：排除动物源成分干扰，批次稳定性优异，符合生物制药的安全性要求

2. 即开即用：预优化全成分体系，无需补加任何试剂，显著降低操作复杂度

3. 高效驯化：支持昆虫细胞从贴壁到悬浮、或从其他培养基直接 / 渐进式驯化，驯化成功率＞95%

4. 高密度支持：细胞峰值密度可达

1.5×107cells/mL

以上（优化培养条件下）

5. 表达增强：与杆状病毒感染兼容，重组蛋白产量较传统培养基提升 30-50%

四、基础参数

五、使用方法

5.1 细胞驯化与传代

5.1.1 基础培养条件

• 温度：27±0.5℃

• 摇床配置：带挡板摇瓶，转速 110-130 rpm，装液量≤30% 瓶体积

• 传代密度：

0.8?1.2×106?′?c???eˋ??/mL

（台盼蓝染色计数）

5.1.2 直接驯化（适用于悬浮适应细胞）

1. 按常规传代比例（如 1:3 稀释）直接用 CW003 培养基替换原培养基

2. 维持培养条件不变，连续传代 2-3 次即可完成适应

5.1.3 渐进式驯化（适用于贴壁细胞或敏感细胞）

1. 起始阶段：原培养基中复苏细胞，连续传代 2-3 次至对数生长期（活力＞95%）

2. 混合过渡：

• 第 1 代：原培养基: CW003 = 75:25，细胞密度

0.8×106cells/mL

• 第 2 代：比例调整为 50:50，密度

1.0×106cells/mL

• 第 3-4      代：比例提升至 10:90，密度

1.1×106cells/mL

，每 48 小时传代

3. wan全适应：过渡至 100% CW003 培养基，连续传代 3 次，若细胞倍增时间＜24 小时且活力＞92%，驯化完成

5.2 细胞复苏

1. 快速解冻：从液氮中取出冻存管，37℃水浴震荡，120 秒内完成解冻（残留少量冰晶时停止）

2. 换液操作：

• 将细胞悬液转入 50mL 离心管，加入 10mL 预热（27℃）的 CW003 培养基

• 离心条件：175×g，5 分钟，弃上清

• 用      20-30mL 预热培养基重悬，接种至摇瓶，初始密度

0.3?0.5×106cells/mL

5.3 细胞冻存

1. 细胞筛选：选择对数生长期（活力＞98%）、密度

2.0?2.5×106cells/mL

的细胞

2. 冻存液配制（现用现配）：

• 45% 新鲜 CW003 培养基 + 45% 细胞培养上清 + 10% DMSO（体积比）

• 混匀后      4℃预冷，避免长时间存放

3. 操作步骤：

• 离心收集细胞：175×g，5 分钟，弃上清

• 用预冷冻存液重悬至密度

1.0?2.0×107cells/mL

（推荐

2.5×107cells/mL

）

• 分装至冻存管（1mL / 支），标注信息后放入 4℃预冷的程序降温盒（含异丙醇）

• -80℃过夜（降温速率 1℃/ 分钟），次日转入液氮保存

六、注意事项

1. 无菌操作：所有操作需在生物安全柜中进行，避免交叉污染

2. 培养基管理：开封后需避光储存，避免反复冻融；使用前需平衡至室温（20-25℃）

3. 过程监控：高密度培养时建议每 24 小时监测细胞密度、活力及 pH 值，必要时进行补料或气体调节

4. 病毒感染：杆状病毒感染前建议将细胞密度调整至

1.0?1.5×106cells/mL

，MOI 值根据具体蛋白优化

七、质量保证

本产品经严格质检，包含以下检测项：

• 无菌检测（细菌、真菌、支原体）

• 内毒素检测（≤10 EU/mL）

• 细胞增殖测试（sf9 细胞倍增时间＜22 小时）

• 表达兼容性测试（GFP 蛋白表达效率＞90%）