透射電鏡簡(jiǎn)介：

透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡(jiǎn)稱(chēng)TEM),可以看到在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看清的小于0.2um的細(xì)微結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)稱(chēng)為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須選擇波長(zhǎng)更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡，電子束的波長(zhǎng)要比可見(jiàn)光和紫外光短得多，并且電子束的波長(zhǎng)與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說(shuō)電壓越高波長(zhǎng)越短。目TEM的分辨力可達(dá)0.2nm。

透射電鏡制備注意事項(xiàng)（細(xì)胞）：

1、細(xì)胞數(shù)量:> 1*10的6次方;。

2、消化細(xì)胞時(shí)要注意不要過(guò)度，及時(shí)用含血清的培養(yǎng)液終止消化；

3、終止消化后，預(yù)冷的PBS (pH7.4 )洗細(xì)胞1-2次，離心( 1500rpm, 5min) 棄上清(細(xì)胞好收集在1.5ml 的EP管中)；

4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液)，可用吸管輕輕吹散細(xì)胞，使細(xì)胞懸浮于固定液中；

5、4度固定過(guò)夜后寄出(寄送時(shí)加冰袋,并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿(mǎn))。

透射電鏡實(shí)驗(yàn)流程：

1、取材

2、固定

3、脫水

4、包埋

5、固化

6、超薄切片機(jī)切片(50-60 nm)

7、3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色

8、透射電鏡觀察，拍片