試劑盒應(yīng)用
本試劑盒主要用于細(xì)菌16S rDNA 的快速檢測，無需經(jīng)過繁瑣的基因組DNA 提取純化，取樣后直接PCR 擴(kuò)增即可獲得16S rDNA 信息，通過比對16S 片段序列，終獲得細(xì)菌種屬信息。本試劑盒可以檢測低至104 個/mL 個細(xì)菌，對難培養(yǎng)、珍貴樣本、表型不能鑒定的未知細(xì)菌快速擴(kuò)增尤為方便。使用本試劑盒無需提取純化，可直接對菌斑、甘油菌或?qū)?shù)菌進(jìn)行檢測，從而
大大縮短了檢測時間。試劑盒中提供的16S PCR Premix 已包含有染料，PCR 結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，PCR 產(chǎn)物可直接進(jìn)行測序分析。本產(chǎn)品僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。
保存條件
-20oC 保存。使用時請置于冰上。
使用方法
1、樣本準(zhǔn)備：
1）菌液：取對數(shù)菌液1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中。
2）甘油菌：取1μL 菌液加入PCR 反應(yīng)體系中。
3）單菌落：無菌吸頭或者無菌牙簽挑取單個菌落置于500 μL 無菌生理鹽水中，渦旋混合均勻，取
1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中。
2、推薦PCR 反應(yīng)體系
4、瓊脂糖凝膠電泳
使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，不同菌株電泳片段稍微差別，一般為1.5kb 左右。
5、PCR 產(chǎn)物回收和測序
使用切膠回收試劑盒進(jìn)行回收，并使用以下推薦引物進(jìn)行測序。將DNA 測序結(jié)果與NCBI 數(shù)據(jù)
庫進(jìn)行比對，確定細(xì)菌種類。
注意事項
1、超凈臺中操作，應(yīng)佩戴無菌手套，穿實(shí)驗服，操作用75%乙醇對實(shí)驗器具進(jìn)行消毒。
2、使用無菌吸頭和離心管，開蓋務(wù)必輕柔，減少氣溶膠污染。
3、盡可能使用2 次純化細(xì)菌，以提高測序成功率。
4、盡可能使用對數(shù)的細(xì)菌。
5、為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。
