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PCR儀實驗過程碰到這些問題,應該怎么辦

閱讀:937        發(fā)布時間:2024/9/30
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基因擴增儀主要用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增等。
光學檢測系統(tǒng):
1、光源:五個LED,各LED激發(fā)波長不同,保證每個通道的熒光素由優(yōu)質的激發(fā)光激發(fā)
2、探測器:CCD,確保整板同時檢測,數(shù)據(jù)間可比性強
3、激發(fā)波長范圍:475nm-640nm
4、發(fā)射波長范圍:520nm-740nm
5、五個檢測通道:可同時能做四色檢測
6、線性范圍:11個數(shù)量級
7、靈敏度:可檢測到單拷貝
PCR儀部分:
1、半導體模塊加熱制冷
2、樣品容量:96孔
3、升溫速率:>5℃/秒,降溫速率>4.5℃/秒
4、溫度精度:+/- 0.25℃
5、溫度均一性:溫度均一性:≤±0.3℃
6、溫控范圍:4℃-99.9℃
7、熔解曲線檢測時,升降溫速率可到0.01℃/sec可調
8、熱蓋溫度:30℃-110℃可調
擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺:
常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系,與反應起始時RNA的總量及純度有關,建議在試驗中加入對照RNA。
第一鏈的反應產物在進行PCR擴增時,在總的反應體系中的含量不要超過1/10,建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級結構,如環(huán)狀結果,有可能導致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉錄酶無法從此引物進行有效延伸。
目的mRNA中含有強的轉錄中止位點,可以試用以下方法解決:
a.將第一鏈的反應溫度提高至50℃。
b.使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行第一鏈反應。
 

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