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Stable Chemically Competent Cell

基因型：

F'proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ?(ara-leu)7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rphspoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

简要说明：

Stable菌株是 NEB公司开发的高转化效率菌株，是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有与Stbl2，Stbl3   wan全不同的基因型，但是表现出比Stbl2，Stbl3 更优异的性能，特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA 片段的克隆。基因组含有重组酶 recA1 rel A1 突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；同时含有核酸酶 endA1突变，避免了提取质粒过程中核酸酶的污染，大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15 的存在使Stable可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素和lian霉素抗性，Stable感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1 Stable感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的 DNA（质?；蛄硬铮┎⒂檬謆o打 EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45秒，迅速放回冰上并静置 5分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温 S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。

4.37℃，225 rpm复苏 60 分钟或30℃，225 rpm复苏 90 分钟。(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化 control pUC19 计算转化效率，则需 37℃，225 rpm复苏 60 分钟）

5. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。 

6. 将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。 (当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需 37℃培养过夜)

注意事项：

1. 对不稳定 DNA 片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在 30℃培养，以减少发生错误重组的概率。 

2. 制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。 

3. 对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。

4. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率?；烊肽康?DNA 时应轻柔操作。

5. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。