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Stbl2 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thisupE44 relA1 λ-Δ(lac-proAB)

简要说明：

Stbl2菌株来源于JM109 E.coli strain，适合克隆不稳定插入片段（正向重复序列，逆转录病毒序列等）；mcrA突变和mcrBC-hsdRMS-mrr deletion使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列；同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。High5TM系列Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率可达109cfu/μg DNA。

操作说明：

1.Stbl2感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质?；蛄硬铮┎⒂檬执駿P管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入0.9 mL 室温 S.O.C. 培养基或LB培养基(推荐使用S.O.C培养基，提高转化效率)。

4.30℃，225 rpm复苏90分钟。（当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟。） 

5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。 

6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。（若转化controlPUC19 计算转化效率，则需37℃培养过夜）。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 

3.转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木俊?/p>

 4.S.O.C.或LB培养基均可使用，S.O.C.可提高转化效率20%；实验人员可选择在37℃或30℃培养细胞，37℃条件下，菌生长速度加快，有利于提高质粒产量，30℃培养可降低错误重组概率。