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Chemically Competent Cell克隆感受态细胞     Mach1-T1 Chemically Competent Cell 

基因型：

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1 tonA

简要说明：

Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而来，是目前生长速度较快的感受态细胞之一，在平板上 9 h 可见克隆，缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA1398)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可用于蓝、白斑筛选；tonA 突变赋予 Mach1-T1 菌株对噬菌体T1 和 T5 的抗性。Mach1-T1 感受态细胞 经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>5x108 cfu/μg DNA

操作说明：

1.Mach1-T1 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的 DNA（质?；蛄?产物）并用手打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。

2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌2YT 或 LB培养基，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。

4.5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13 h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间 存放会降低转化效率。

2.混入目的 DNA 时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木俊?/p>