液相色譜儀的正確使用方法

一、開機(jī)前準(zhǔn)備：環(huán)境與系統(tǒng)檢查

1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求

• 溫濕度：溫度控制在 15-30℃（推薦 20-25℃），濕度≤70%，避免空調(diào)直吹儀器（防止基線波動(dòng)）。

• 電源：使用穩(wěn)壓電源（220V±10%），接地良好，避免與大功率設(shè)備共用電線。

2. 流動(dòng)相準(zhǔn)備

• 溶劑純度：使用色譜純試劑（如甲醇、乙腈），水需為超純水（電阻率≥18.2 MΩ?cm），緩沖鹽需新鮮配制并過濾。

• 脫氣處理：流動(dòng)相需通過超聲脫氣 10-20 分鐘（或使用在線脫氣機(jī)），避免氣泡進(jìn)入泵和色譜柱（導(dǎo)致基線噪音或柱效下降）。

• 過濾要求：用 0.45 μm 濾膜過濾流動(dòng)相（有機(jī)相用尼龍膜，水相用纖維素膜），防止固體顆粒堵塞泵閥或色譜柱。

3. 色譜柱檢查

• 確認(rèn)色譜柱類型（如 C18、氨基柱）與方法匹配，觀察柱效（如用標(biāo)準(zhǔn)品測試?yán)碚撍鍞?shù)），若柱壓異常升高需沖洗或更換。

二、開機(jī)與系統(tǒng)平衡：避免損傷核心部件

1. 開機(jī)順序

• 先開啟檢測器、柱溫箱等外圍設(shè)備，再啟動(dòng)泵和工作站（如 Agilent OpenLAB、Waters Empower）。

• 示例：打開計(jì)算機(jī)→開啟液相色譜儀電源→啟動(dòng)工作站軟件→初始化系統(tǒng)。

2. 沖洗流路與排氣泡

• 泵排氣：將吸濾頭從初始流動(dòng)相瓶中取出，放入純甲醇 / 乙腈瓶中，打開排空閥（purge valve），以 3-5 mL/min 流速?zèng)_洗 1-2 分鐘，直至管路無氣泡（觀察廢液管流出液體是否連續(xù)）。

• 更換流動(dòng)相：若需使用緩沖鹽，先用 10% 甲醇水（低有機(jī)相）沖洗泵和流路（避免鹽結(jié)晶），再切換至目標(biāo)流動(dòng)相。

3. 系統(tǒng)平衡

• 設(shè)定流速（如 1.0 mL/min）和柱溫（如 30℃），用流動(dòng)相沖洗色譜柱至基線穩(wěn)定（UV 檢測器基線波動(dòng)≤±0.001 AU，示差檢測器需更長平衡時(shí)間）。

• 記錄初始柱壓（正常范圍應(yīng)與儀器說明書一致），若壓力波動(dòng)超過 ±5% 需排查原因（如氣泡、柱污染或堵塞）。

三、樣品分析：規(guī)范進(jìn)樣與數(shù)據(jù)采集

1. 樣品預(yù)處理

• 樣品需用 0.45 μm 濾膜過濾（或離心），避免顆粒堵塞進(jìn)樣閥或色譜柱。

• 溶解樣品的溶劑強(qiáng)度應(yīng)低于流動(dòng)相（如流動(dòng)相為 50% 乙腈，樣品用 30% 乙腈溶解），防止溶劑效應(yīng)導(dǎo)致峰展寬或分叉。

2. 進(jìn)樣操作

• 手動(dòng)進(jìn)樣閥：將閥切換至 “LOAD" 位，用平頭注射器吸取略多于定量環(huán)體積的樣品（如定量環(huán) 20 μL，吸取 50 μL），排空氣泡后注入，迅速切換至 “INJECT" 位。

• 自動(dòng)進(jìn)樣器：按方法設(shè)置進(jìn)樣體積和洗針程序（如用流動(dòng)相清洗針頭，避免交叉污染），樣品瓶需規(guī)范放置在托盤指定位置。

3. 數(shù)據(jù)采集與監(jiān)控

• 進(jìn)樣后立即啟動(dòng)數(shù)據(jù)采集，觀察色譜圖峰形和保留時(shí)間是否正常（如出現(xiàn)肩峰、拖尾需排查柱效或流動(dòng)相比例）。

• 運(yùn)行過程中避免震動(dòng)儀器或更改方法參數(shù)，定期查看廢液瓶液位，防止溢出。

四、關(guān)機(jī)與維護(hù)：延長儀器壽命

1. 關(guān)機(jī)前沖洗

• 含緩沖鹽的流動(dòng)相：先用 10% 甲醇水沖洗泵和色譜柱 30 分鐘以上（流速 0.5-1.0 mL/min），清除鹽類殘留，再用純甲醇 / 乙腈沖洗 20 分鐘封存色譜柱（防止微生物滋生）。

• 不含緩沖鹽的流動(dòng)相：直接用純甲醇 / 乙腈沖洗色譜柱（反相柱）或正己烷（正相柱），流速逐步降至 0.3 mL/min，維持 10 分鐘后停泵。

2. 關(guān)機(jī)順序

• 先關(guān)閉泵和檢測器，再退出工作站軟件，最后關(guān)閉儀器電源和計(jì)算機(jī)。

• 長期停機(jī)（超過 1 周）時(shí)，色譜柱需從儀器上卸下，兩端用堵頭密封，按類型存放（如 C18 柱存于純甲醇中）。

3. 日常維護(hù)要點(diǎn)

• 泵系統(tǒng)：定期更換吸濾頭（每 3-6 個(gè)月），檢查密封圈磨損情況（漏液時(shí)及時(shí)更換）。

• 進(jìn)樣閥：每周用無水乙醇清洗定量環(huán)（手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)），自動(dòng)進(jìn)樣器需定期清潔樣品盤和洗針池。

• 檢測器：UV 檢測器流通池污染時(shí)，用 30% 硝酸水溶液沖洗（注意避免反沖）；示差檢測器需定期排氣，防止棱鏡結(jié)露。

五、常見問題與應(yīng)對策略

六、安全注意事項(xiàng)

1. 操作有機(jī)溶劑時(shí)需在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行，避免明火和靜電（如乙腈易揮發(fā)且易燃）。

2. 處理強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有毒試劑時(shí)，需佩戴手套和護(hù)目鏡，廢液分類收集并交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理。

3. 禁止在泵運(yùn)行時(shí)拆卸流路部件，避免高壓液體噴射造成傷害。

正確使用液相色譜儀需兼顧細(xì)節(jié)操作與系統(tǒng)維護(hù)，定期進(jìn)行性能驗(yàn)證（如校準(zhǔn)保留時(shí)間、靈敏度測試），并建立完整的儀器使用記錄（包括維護(hù)時(shí)間、故障處理等）。通過標(biāo)準(zhǔn)化操作，可顯著提升分析結(jié)果的可靠性，同時(shí)延長儀器核心部件（如色譜柱、泵閥）的使用壽命。