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基本信息

主題：納米銅毒理評(píng)價(jià)新體系——活體斑馬魚(yú)皮膚細(xì)胞排氫排銨速率

期刊：Chemosphere

影響因子：5.778

研究使用平臺(tái)：NMT斑馬魚(yú)創(chuàng)新科研平臺(tái)

標(biāo)題：Exposure to copper nanoparticles impairs ion uptake, and acid and ammonia excretion by ionocytes in zebrafish embryos

作者：中國(guó)臺(tái)灣師范大學(xué)林豊益、Chih-Ying Lee

檢測(cè)離子/分子指標(biāo)

H⁺、NH₄⁺

檢測(cè)樣品

斑馬魚(yú)胚胎皮膚離子細(xì)胞

摘要

銅納米顆粒（CuNPs）對(duì)魚(yú)類早期階段的潛在毒性尚不清楚，關(guān)于其對(duì)離子細(xì)胞及相關(guān)功能的影響也知之甚少。本研究使用斑馬魚(yú)胚胎作為模型來(lái)研究CuNPs對(duì)兩種亞型離子細(xì)胞的毒性作用。斑馬魚(yú)胚胎暴露在0.1、1和3 mg L^-1 CuNPs中96 h。暴露后，≥0.1 mg L^-1時(shí)全身Na⁺和Ca²⁺含量顯著降低，而≥1 mg L^-1時(shí)K⁺含量降低。當(dāng)≥1 mg L^-1時(shí)，皮膚分泌的H⁺和NH₄⁺明顯減少。當(dāng)CuNPs≥0.1 mg L^-1時(shí)，用若丹明-123標(biāo)記的活離子細(xì)胞數(shù)量顯著減少。用免疫組織化學(xué)法標(biāo)記富含H⁺-ATPase（HR）和富含Na⁺/K⁺-ATPase（NaR）的離子細(xì)胞亞型在≥1 mg L^-1時(shí)呈下降趨勢(shì)。通過(guò)掃描電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)離子細(xì)胞的頂端開(kāi)口的收縮。功能損傷還反映在基因表達(dá)的變化上，包括離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/通道和Ca²⁺調(diào)節(jié)激素。該研究表明，CuNPs暴露可損害斑馬魚(yú)胚胎中兩種亞型的離子細(xì)胞及其相關(guān)功能，包括Na⁺/Ca²⁺吸收和H⁺/NH₄⁺分泌。

離子/分子流實(shí)驗(yàn)處理方法

納米銅顆粒（CuNPs）處理斑馬魚(yú)胚胎96 h

使用非損傷微測(cè)技術(shù)（NMT）檢測(cè)斑馬魚(yú)胚胎皮膚離子細(xì)胞對(duì)H⁺和NH₄⁺的分泌。

林豊益《NMT在斑馬魚(yú)離子細(xì)胞的應(yīng)用：從生理到環(huán)境毒理》

如圖1A所示，H⁺和NH₄⁺分泌水平通過(guò)計(jì)算卵黃囊和背景溶液之間（距離10 mm）的濃度梯度（Δ[H⁺]和Δ[NH₄⁺]）來(lái)測(cè)量。先前的研究表明卵黃囊皮膚中有豐富的離子細(xì)胞，其測(cè)量值可以反映離子細(xì)胞的功能。胚胎暴露于CuNPs 96 h后，1和3 mg L^-1CuNPs組的H⁺和NH₄⁺分泌水平被顯著抑制（圖1B, C）。H⁺分泌減少了29%（1 mg L^-1）和30%（3 mg L^-1）。NH₄⁺分泌減少了47%（1 mg L^-1）和61%（3 mg L^-1）。

圖1. 斑馬魚(yú)胚胎暴露于CuNPs 96 h后的H⁺和NH₄⁺分泌

其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果

• CuNPs處理會(huì)使斑馬魚(yú)胚胎Na⁺、K⁺、Ca²⁺含量下降，但0.1 mg L^-1的CuNPs處理沒(méi)有改變K⁺含量。

• CuNPs處理后斑馬魚(yú)皮膚離子細(xì)胞密度顯著下降。

• 免疫組織化學(xué)方法觀察HR和NaR細(xì)胞亞型的密度發(fā)現(xiàn)，CuNPs處理會(huì)導(dǎo)致HR和NaR細(xì)胞密度下降。

• 用掃描電鏡分析了細(xì)胞頂端表面的超微結(jié)構(gòu)，對(duì)照組HR細(xì)胞頂膜呈碎屑狀，CuNPs處理組卻發(fā)現(xiàn)了小凹坑。通過(guò)對(duì)細(xì)胞頂端表面的面積分析后發(fā)現(xiàn)，1和3 mg L^-1CuNPs處理使細(xì)胞頂端表面的尺寸明顯減小。

結(jié)論

測(cè)試液

AFW, 300 mM3-(n-morpholino) propanesulfonic acid (MOPS) buffer, 0.1 mg L^-1 ethyl3-aminobenzoate methanesulfonate(tricaine)