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六、检测步骤1、取出所需要使用的微孔板板孔（室温放置5-10分钟），注意不要破坏剩余微孔板的板膜，并将剩余板孔放入密封袋中4-8℃避光保存，防止板孔变干。2、将50ml待测样品加入检测孔中，并同时设立阴性对照（不含抗生素的牛奶）和阳性对照（含较高浓度抗生素的牛奶，如含10mg/L青霉素G的牛奶）。3、用盖板膜盖好板孔，置于65℃培养箱或水浴锅中培养，反应时间参考试剂盒标签提示。4、反应结束后，将检测板倒扣静置，待板条冷却回室温后，从检测孔侧面观测颜色变化，并进行结果判读

。七、结果判定将反应完毕的检测板冷却回室温后，从检测孔侧面目视观察检测孔的颜色变化。（1）若测试孔的颜色为紫色，则表明测试样品为阳性；（2）若测试孔的颜色为黄色，则表明测试样品为阴性；（3）若测试孔的颜色介于紫色和黄色之间或变色不*，则表明样品抗生素含量处于检测限范围内，样本可疑。 

注：阴性对照变为黄色，阳性对照仍为紫色，表明实验成立，对于可疑样品建议做重复试验。若阴性对照未*变黄可适当延长反应时间。

八、检测注意事项：取出所需检测板孔后，请将未用板孔重新放进自封袋密封。因部分抗生素对反应时间比较敏感（如：磺胺类、四环素类），若需要进行精确检测灵敏度检测时，建议用阴性对照控制确切的反应时间，具体操作方法为：当检测时间到2h15min后开始对阴性对照孔进行颜色观察，建议每10min观察一次，直至阴性对照检测孔变为黄色为止开始对其它检测反应孔进行结果判读。（此法对磺胺类、四环素类检测灵敏度要求高的样品尤为适用）建议每次检测时做阴性对照和阳性对照。阴性对照为一个不含抗生素的牛奶样品；阳性样品为一个含有高浓度抗生素的牛奶样品（如含10mg/L青霉素G的牛奶样品）。实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同试剂或样品时需要更换吸头。本试剂盒对生物素和其他抑菌类的一些物质十分敏感，如清洁剂、消毒剂或防腐剂等。实验过程中需避免此类物质的污染。样品中少量的天然抑菌素不会影响到试剂盒的检测结果，但初乳、产奶末期和乳腺炎中含有较高浓度的抑菌素，会影响到检测结果的准确性。该试剂盒*反应温度为65℃，温度过高或过低以及温度波动过大都会影响反应时间以及检测结果的准确度。建议利用精确方法进行检测反应，具体操作步骤见注意事项2。当未使用板孔培养基颜色出现异常，请勿继续使用。