鼠抗人CD44v6单克隆抗体

广州健仑生物科技有限公司

CD44V6是CD44家族的异构体之一，该抗原主要存在于上皮细胞内。有研究表明CD44V6的高表达与多种恶性肿瘤的侵袭相关，而其低表达则与肺低分化腺癌及鳞癌、低分化膀胱癌及低分化前列腺癌相关。主要用于各种上皮源性肿瘤的研究，如乳腺癌、结肠癌及肺癌等。

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌、化妆品检测、食品安全检测等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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【产品介绍】

细胞定位：细胞膜

克隆号：VFF-7

同型：IgG1/K

适用组织：石蜡/冰冻

阳性对照：膀胱癌/肺鳞癌

抗原修复：热修复（EDTA）

抗体孵育时间：30-60min

二、操作步骤
1. 收集凋亡细胞：取1～2×106 个细胞，离心后，立即用70%酒精（-20℃）固定2h；
2. 洗涤：取出酒精固定的细胞，1000r/min离心5min ，去掉上清液，PBS洗二次；
3. 裂解细胞：加400μl细胞裂解液，充分混匀再加蛋白酶K100μl，置65℃水浴消化2小时或过夜；
4. 蛋白处理：加75μl 8mol/L的醋酸钾，4℃15min，再加750μl抗原抗体，充分混匀后，10000r/min离心10分钟后，将上清移至一新的Eppendorf管中；
5. 沉淀DNA：加入750μl无水乙醇，上下轻柔颠倒混合，即可见乳白色沉淀，若不明显时可置-20℃过夜，12000r/min离心10分钟，去上清；
6. 洗涤DNA：加1ml70%乙醇，混匀，10000r/min 离心5min，去上清；
7. 溶解DNA：根据 DAN 沉淀的大小，加一定量的蒸馏水或TE，37℃溶解；
8. 测定DNA浓度；
9. 2%琼脂糖凝胶电泳80V 2小时；
三、结果判断
出现梯状电泳条带，zui小的条带为180～200 bp，其他的条带为其整倍数大小。坏死细胞则出现弥散的电泳条带，无清晰可见的条带。正常细胞DNA基因条带因分子量大，迁移距离短，故停留在加样孔附近。
转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

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Second, the steps
1. Collect apoptotic cells: Take 1 ~ 2 × 106 cells, centrifuge, immediay with 70% alcohol (-20 ℃) ??fixed 2h;
2. Washing: remove the fixed cells of alcohol, centrifuge at 1000r / min for 5min, remove the supernatant and wash twice with PBS;
3. Lysis of cells: add 400μl cell lysis solution, mix well with protease K100μl, set 65 ℃ water bath for 2 hours or overnight;
4. Protein processing: add 75μl of 8mol / L potassium acetate, 4 ℃ 15min, add 750μl of antigen and antibody, mix well and centrifuge at 10000r / min for 10 minutes, then transfer the supernatant to a new Eppendorf tube;
5. Precipitated DNA: add 750μl of absolute ethanol, gently mix up and down, milky white precipitate can be seen, if not obvious can be set at -20 ℃ overnight, 12000r / min for 10 minutes to the supernatant;
6. Wash DNA: Add 1ml70% ethanol, mix, 10000r / min centrifugation 5min, to the supernatant;
7. Dissolved DNA: According to the size of DAN precipitation, plus a certain amount of distilled water or TE, dissolved at 37 ℃;
8. Determination of DNA concentration;
9. 2% agarose gel electrophoresis 80V 2 hours;
Third, the result to judge
The ladder electrophoresis bands, the smallest band 180 ~ 200 bp, the other bands for the whole multiple size. Necrotic cells appear dispersed electrophoresis bands, no clear visible bands. Normal cell DNA gene band because of large molecular weight, migration distance is short, so stay in the sample hole near.
Transfection is a specialized technique for introducing exogenous genes into cells. With the further study of gene and protein function, transfection has become the basic method often involved in laboratory work. Transfection can be roughly divided into physical-mediated, chemical-mediated and bio-mediated three types of pathways. Electroporation, microinjection, and gene gun belong to the paradigm of gene transfer into cells by physical methods; there are many chemical mediation methods, such as classical calcium phosphate coprecipitation, liposome transfection methods, and various cationic species-mediated Technology; bio-mediated method, a more primitive protoplast transfection, and now more common various virus-mediated transfection technology.