人视网膜微血管内皮原代细胞

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人视网膜微血管内皮细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。第一神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。第二层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性，在脑和视网膜中，这些内皮细胞具有内屏障的功能，在调节血管生理状态，释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用，体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。

方法简介：

公司实验室分离的人视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人视网膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　?、?消化培养法

　?、?悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

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　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。(该细胞传代次数有限约 2 代，建议客户收到细胞后尽快安排后续实验)

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培养箱中静置 6-8 小时，以稳定细胞状态。

2、待细胞达到 80%汇合时准备进行传代培养。

3、细胞传代：

1)吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。

2)加入 0.125%消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 3min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入培养液终止消化。

3)用吸管轻轻吹打混匀，按 1:2 或 1:3 等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的培养基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养。

4)待细胞贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的培养基。

CLMP Others Mouse 小鼠 ASAM / ACAM 人细胞裂解液   KYSE70细胞，人食管鳞癌 神经胶质瘤细胞,SHG-44细胞 猪肾传代细胞;IBRS-2  EPOR Others Mouse 小鼠 EPOR 人细胞裂解液   SK-MES-1(人肺鳞癌细胞) 小鼠原代视网膜色素上皮细胞 兔原代巩膜成纤维细胞

α2-巨球蛋白(α2M)重组蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

IL9 Protein Human 重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

ICOS重组小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 标签) Protein

CDH18 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白

HNRNPR重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签) Protein

人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 试剂盒

Human tumor specific aigen (TSA) ELISA Kit 人肿瘤特异性抗原(TSA)试剂盒

HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humaninsulinaoaibodies,IAA试剂盒人胰岛素自身抗体(IAA)试剂盒规格：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-9)琥珀酰明胶法比色定量试剂盒20次

HumanLegionellaaibodyIgM，LPAb-IgMELISAKit人军团菌抗体IgM(LPAb-IgM)试剂盒规格：96T/48T

人整合素连接激酶1(ILK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人视网膜微血管内皮原代细胞豚鼠内皮素1(ET-1)试剂盒 ，英文名： ET-1 ELISA Kit

Human low density lipoprotein immune complexes (LDL-IC) ELISA Kit 人低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)试剂盒

MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit白介素2受体(IL-2R)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBigET(HumanBigEndothelin)ELISAKit人大内皮素

细菌尿素酶(UREASE)活性定性染色试剂盒20次

rabbitLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit兔子白三烯B4(LTB4)试剂盒规格：96T/48T

ACVR2A重组小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽1-28(多肽蛋白)

NRG1重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签) Protein

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重组人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

FZD4 Protein Rat 重组大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 标签)