大鼠角膜内皮原代细胞

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以?；ぱ劬?。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵"功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠角膜内皮细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　?、?消化培养法

　　③ 悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

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　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。(该细胞传代次数有限约 2 代，建议客户收到细胞后尽快安排后续实验)

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培养箱中静置 6-8 小时，以稳定细胞状态。

2、待细胞达到 80%汇合时准备进行传代培养。

3、细胞传代：

1)吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。

2)加入 0.125%消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 3min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入培养液终止消化。

3)用吸管轻轻吹打混匀，按 1:2 或 1:3 等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的培养基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养。

4)待细胞贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的培养基。

ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人细胞裂解液   少突胶质细胞生长添加物OGS  EPHA6 Others Mouse 小鼠 EphA6 / EHK-2 人细胞裂解液   小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3); 猪原代骨骼肌成纤维细胞 小鼠原代膀胱上皮细胞

神经颗粒素(NRGN)重组蛋白 Recombinant Neurogranin (NRGN)

IL3RA Protein Human 重组人 IL3RA / CD123 蛋白 (His & Fc 标签)

FKBP1A重组人 FKBP12 蛋白 Protein

HA Protein Influenza 重组甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

LPAL2重组人 LPAL2 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)试剂盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗胶原蛋白抗体(CLA)试剂盒 96T/48T 进口分装

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG试剂盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)试剂盒规格：96T/48T

瑞氏－姬姆萨复合染液   Vascular permeability test solion

姬姆萨染液   Peroxidase staining

巴氏染液（脱落细胞染色）   Name

快速H－E组织细胞及脱落细胞染液   Phosphate buffer

大鼠角膜内皮原代细胞植物激素脱落酸(ABA)ELISA 试剂盒

Human ai RNP aibody (RNP-Ab) ELISA Kit 人抗核糖核蛋白抗体(RNP-Ab)试剂盒

Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAFA(Humanai-filaggrinaibody)ELISAKit人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体

血液氧化型(GSSG)浓度比色法定量试剂盒50次

MousesubstancePreceptor,SP-RELISAKit小鼠P物质受体(SP-R)试剂盒

CD2重组大鼠 CD2 蛋白  Protein

Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1 0.5mgFut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 阶段特异性胚胎表面抗原-1抗原

PARK7重组人 PARK7 / DJ-1 蛋白 (His 标签) Protein

AMPK Protein Human 重组人 AMPK (G1/B2/A1) Heterotrimer 蛋白

ICAM2 Protein Mouse 重组小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白