大鼠巩膜成纤维原代细胞

培养信息：

包被条件 贴壁不包被

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠巩膜成纤维细胞分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和?；ぱ勰谧橹淖饔?。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　?、?消化培养法

　?、?悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

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　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株 Human  原代系膜细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml  人急性单核细胞白血病细胞;THP-1  人脐带血单个核细胞 人肺成纤维细胞，Hs888Lu细胞 F9(畸胎瘤细胞) 猪原代肾上腺髓质细胞 兔原代胸腺基质细胞

LOX-1/OLR1 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体 0.5mgLOX-1/OLR1 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体

AARSD1 Protein Human 重组人 AARSD1 蛋白 (His 标签)

REG1B重组食蟹猴 REG1B / PSPS2 蛋白 (His 标签) Protein

KLK11 Protein Mouse 重组小鼠 KLK11 / Kallikrein-11 蛋白 (His 标签)

KLK8重组人 KLK-8 / Kallikrein-8 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA 试剂盒

Rat anaphylatoxin / compleme fragme 4a (C4a) ELISA Kit 大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)试剂盒

HumanactivatedproteinC,APCELISAKit 人活化蛋白C(APC)试剂盒 进口分装

Chickenniicoxide,NO试剂盒鸡(NO)试剂盒

载玻片细胞P35蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseFollistatin,FSELISAKit小鼠卵泡抑素(FS)试剂盒

小鼠脱酶(ID)试剂盒   96T/48T

小鼠褪黑素(MT/MLT)试剂盒   96T/48T

小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)试剂盒   96T/48T

小鼠透明质酸(HA)试剂盒   96T/48T

大鼠巩膜成纤维原代细胞猪单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA 试剂盒

Human macrophage colony stimulating factor receptor (M-CSFR) ELISA Kit 人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)试剂盒

PorcinevonWillebrandFactor,vWFELISAKit 猪血管性血友病因子/瑞斯托辅因子(VWF)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha1-AT(HumanAlpha1-Aiypsin)ELISAKit人α1抗

血液0酸二酯酶1(PDE1)活性荧光定量试剂盒10次

Mouseβ-Defensins,β-DFELISAKit小鼠β-防御素(β-DF)试剂盒

IL18R1重组小鼠 IL-18R1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一种原癌基因)抗原

CSF2重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

IL36B Protein Human 重组人 IL36B / IL1F8 蛋白

FSTL3 Protein Mouse 重组小鼠 FLRG / Fstl3 蛋白

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。(该细胞传代次数有限约 2 代，建议客户收到细胞后尽快安排后续实验)

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培养箱中静置 6-8 小时，以稳定细胞状态。

2、待细胞达到 80%汇合时准备进行传代培养。

3、细胞传代：

1)吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。

2)加入 0.125%消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 3min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入培养液终止消化。

3)用吸管轻轻吹打混匀，按 1:2 或 1:3 等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的培养基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养。

4)待细胞贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的培养基。