操作流程
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
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实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
下列是公司正在销售的产品：
5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  中文名：  分子式：C13H15N3O2  度：98.0%  小鼠Ⅲ型前胶原肽elisa试剂盒   小鼠Ⅲ型前胶原肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠Ⅲ型前胶原肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠Ⅲ型前胶原肽试剂盒、小鼠Ⅲ型前胶原肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Vilazodone   中文名：盐酸维拉唑酮  分子式：C26H28ClN5O2  度：98.0%  小鼠Ⅱ型胶原elisa试剂盒   小鼠Ⅱ型胶原试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠Ⅱ型胶原试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠Ⅱ型胶原试剂盒、小鼠Ⅱ型胶原eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  中文名：  分子式：C10H7F3N2O  度：98.0%  小鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

Teriflunomide  中文名：特立氟胺  分子式：C12H9F3N2O2  度：98.0%  小鼠apelin12(AP12)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  中文名：  分子式：C15H18ClNO3  度：98.0%  小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

103773-62-2  Ganoderic acid C2  5mg  Pericarpium arecae大腹皮PCR鉴定试剂盒 

1037751-81-7  (Asp2??-Glucagon (1-29) (human, rat, porcine)  0.5mg  Pericarpium arecae大腹皮PCR鉴定试剂盒 

1037751-81-7  (Asp2??-Glucagon (1-29) (human, rat, porcine)  1mg  Radix et caulis acanthopanacis senticosi刺五加PCR鉴定试剂盒 

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1037792-44-1  MBX-2982  50mg  Cortex ailanthi椿皮PCR鉴定试剂盒
禽波氏杆菌PCR检测试剂盒1013920-15-4  Vorolanib  10mg  Rhizoma dioscoreae山药染料法PCR鉴定试剂盒 

1013920-15-4  Vorolanib  50mg  Rhizoma dioscoreae山药染料法PCR鉴定试剂盒 

1013920-15-4  Vorolanib  100mg  Radix sophorae tonkinensis山豆根染料法PCR鉴定试剂盒 

1013933-37-3  CP 376395 hydrochloride  10mg  Radix sophorae tonkinensis山豆根染料法PCR鉴定试剂盒 

1013933-37-3  CP 376395 hydrochloride  50mg  Pseudobulbus cremastrae seu pleiones山慈菇染料法PCR鉴定试剂盒
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。产品仅用于科研实验
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。