以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Caspase-5活性测定试剂盒 | Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介绍:
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-5活性。试剂盒测定原理基于Caspase-5特异水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA),释放出游离的硝基pNA,后者呈黄色在405nm具有大吸收峰,用可见光分光光度比色方法测定,吸光度值对应于Caspase-5的水解活性。 细胞凋亡属于程序化细胞死亡,可见于各种器官和细胞,在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。Caspase-5分子量47.7kD,与ICE有51%的同源性,在过量表达时可诱导凋亡发生。 所需仪器:酶标仪与96孔酶标板;或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。 工作波长:大吸收波长405nm,如不具备也可在400~450nm范围内测定。 |
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
谷(标准品)英文名称: 1H-Benzotriazole因子受体样因子1抗体包装500g
谷维(标准品)英文名称: Betahistine Dihydrochloride半胱亚磺脱羧抗体包装1g
呱西替柳(标准品)英文名称: Betahistine Dihydrochloride型肝炎NS2反式调节蛋白/衰老相关的基因10蛋白抗体包装25g
呱西替柳杂质A(杨愈创木酚酯)(标准品)英文名称: Betahistine Dimesilate固合成CYP11B2抗体包装5g
癸(标准品)英文名称: INSULIN分裂周期蛋白8抗体包装1g
桂美(标准品)英文名称: Bismuth oxide 卷曲螺旋结构域蛋白5抗体包装1g
果糖二磷钠(标准品)英文名称: 2-Chloro-1,3-propanediol分裂周期蛋白16抗体包装5g
哈西奈德(标准品)英文名称: Bisoprolol fumarate有丝分裂着丝粒蛋白F抗体包装5g
核黄磷钠混合物(标准品)英文名称: Bromhexine HCl9号染色体开放阅读框115抗体包装25g
红霉(标准品)英文名称: Bupivacaine HClCTDSPL蛋白抗体包装5g
胡椒乙(标准品)英文名称: Bupivacaine HClCTDSPL2蛋白抗体包装1g
琥珀;丁二(标准品)英文名称: Butenafine HCl乙酰酯相关蛋白抗体包装1g
琥珀多西拉敏(标准品)英文名称: Captopril卷曲螺旋结构域蛋白83抗体包装250mg
琥珀泼尼龙(标准品)英文名称: Captopril二氢嘧啶相关蛋白5抗体包装5g
琥珀普卡必利英文名称: (S)-Carbidopa磷化二氢嘧啶样2抗体包装1g
: NRS-1000ATCC43897DSM3037资源名称: 强壮类芽孢杆菌 质量规格:>99%,BP2007,EP5.心肌营养1试剂盒维生A;Vitamin A
微小链霉菌Streptomyces│parvulus 质量规格:>98.5%心肌特异性肌钙蛋白T试剂盒乌头原碱;Aconine
多头节丛孢Arthrobotrys│polycephala 质量规格:HPLC>98%,标准品心肌锚蛋白重复域1试剂盒乌美司;Ubenimex
Caspase-5活性测定试剂盒灰树花 2-氨基-5-氯-3-吡啶,95%肾前体Elisa
根瘤 1-Boc-1-RNA结合基元蛋白8AElisa
澳大利亚糖丝 2-氟-5-氯苯半胱氨酰白三烯受体Elisa
根瘤 吡啶并[3,4-D]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮尿皮质Elisa
酿酒酵母 2,4,6-三氟类缺陷病抗体1+2Elisa
酿酒酵母 4-氯-2-酸高密度脂蛋白2bElisa
维罗纳假单胞 6-氟-2-氯吡啶高密度脂蛋白2Elisa
平脐蠕孢 2-氯盐酸乙脒盐酸盐高密度脂蛋白3Elisa
金黄色葡萄球 N,N-二甲基基硅抗甲流H5(H5N1)血凝蛋白IgG抗体Elisa
玻利维亚盐单胞 2-氧代环戊基乙酸乙酯抗甲流H5(H5N1)血凝蛋白IgM抗体Elisa
草生链霉 1,4-二氮杂-5-环庚酮盐酸盐Flag标签Elisa
金顶侧耳、榆黄磨、金顶磨 1-苄基-4-酮盐酸盐角蛋白19片段Elisa
葡萄座腔 Cbz-O-苄基-L-丝氨酸生长因子Elisa
适宜剑 4-溴-2,5-二氟苯磺酰氯糖原合成激3βElisa
鸡枞(鸡) 雷琐太尔促甲状腺受体Elisa