详细介绍
以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Cell Apoptosis Ethidium Bromide Detection Kit | 100T | 1~3天 |
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
商品介绍:
溴化乙啶(Ethidium Bromide EB)是一种DNA 结合性荧光色素,其激发波长510nm。发射波长595nm。产生桔红色荧光。 EB 不具有膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞,因此用EB 单染时,正常细胞不着色,早期凋亡细胞呈微弱桔红光,晚期凋亡细胞桔红色荧光增强。死细胞呈强桔红光。EB 常与橙合用双染进行凋亡检测,与橙双染时,正常细胞中EB 不能透膜着色,而橙可透过细胞膜,使细胞呈绿色均匀荧光,细胞圆形均匀;而在凋亡细胞中,细胞皱缩、染色质凝聚、固缩或断裂,出芽,凋亡小体形成。染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色颗粒;而坏死细胞被EB 染成桔红色,由此荧光颜色和细胞形态可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 储存:2-8℃,避光,有效期12个月。 |
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
当归尾(标准品)英文名称: Chromium(III) potassium sulfate, dodecahydrateFAM102B蛋白抗体包装5g
当归酰基戈米辛H(标准品)英文名称: Chromium(III) sulfate, hydrateFAM104B蛋白抗体包装100g
当归?;昝仔?/span>O英文名称: Chromotrope FB肾癌下调蛋白1抗体包装25g
当药苷(标准品)英文名称: Chrysophenine凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相关抗原抗体包装5g
当药黄英文名称: Cinnamamide胎盘叶受体蛋白2抗体包装1g
党参(标准品)英文名称: Cinnamon oilFAM13B1蛋白抗体包装5g
党参炔苷(标准品)英文名称: Citral岩藻糖转移8抗体包装5g
德尔塔林(标准品)英文名称: Citrazinic acid卵泡激结合蛋白1抗体包装100g
灯台叶(标准品)英文名称: Cobalt (II) oxalate相互作用蛋白FHL2抗体包装25g
灯心草(标准品)英文名称: Concanamycin A脂肪去饱和1抗体包装5g
灯心草酚英文名称: Copper(I) bromide回肠脂肪结合蛋白抗体包装100g
灯盏细辛(灯盏花)(标准品)英文名称: Copper(II) acetate脂肪型脂肪结合蛋白包装25g
地奥司明(标准品)英文名称: Copper(II) bromide脂肪酰还原2抗体包装250mg
地胆草(标准品)英文名称: Copper(II) citrate, hydrate脆性X相关蛋白样2抗体包装50mg
地肤子(标准品)英文名称: Copper(II) hydroxide脂肪酰解2抗体包装100g
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格:>99%,BR神经生长因子受体试剂盒羟基茜草;Purpurin
死谷芽孢杆菌Bacillus│vallismortis 质量规格:>99%,BR神经生长因子前体试剂盒桤木;Alnusone
酿酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 质量规格:>98.5%神经生长因子试剂盒乔松;Pinocembrin
溴化乙锭EB染色试剂盒大肠埃希氏杆 Sulforhodamine 101木糖基转移Elisa
解淀粉芽孢杆 Gabapentin HCl岩藻糖糖基转移Elisa
根癌土壤杆 Bradykinin triacetate salt生长因子受体结合蛋白2Elisa
拟枝孢镰孢 α-内啡肽蛋白激活亚基1Elisa
葡萄汁有孢汉逊酵母 NeurotensinEB病核抗原1Elisa
复轮生小克银汉霉 Trichostatin AEB病核抗原2Elisa
广岛链霉 Ala-Ala-AlaEB病衣壳抗原Elisa
酿酒酵母 α-Melanocyte stimulating hormone转谷氨酰2Elisa
尖孢镰孢 BRL-54443TM4SF19Elisa
平菇 Laropipran-IGFBP-4Elisa
密歇根棍状杆标记亚种 Gabexate MesylateCT-IGFBP-4Elisa
戊糖片球 WZ811TNFSF10Elisa
Priceomyces sp. 1-Pyrenebutyric hydrazideTRIM55蛋白Elisa
阿姆斯特丹曲霉 Nutlin-3红胰岛受体酪氨酸蛋白激Elisa
枯草芽孢杆枯草亚种 URB597二羟基激2Elisa