商品介绍:
BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒是一种用于免疫组化显色、Western 等膜显色和诱导多功能干细胞iPS 鉴定等的试剂盒。 BCIP/NBT 是碱性磷酸酯酶的常用底物。在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP 会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT 发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 本试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS 的鉴定,也可以用于Western 等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。 组份规格: 试剂A:碱性磷酸酯酶显色缓冲液 100ml 试剂B:BCIP 溶液(300X) 350μl 试剂C:NBT 溶液(150X) 700μl 使用说明 1. 对于组织切片或细胞样品或膜,在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5 次,每次3-5 分钟。对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品,在适当固定后,也用适当洗涤液洗涤3-5 次,每次3-5 分钟。 2. 按照如下比例依次加入各溶液,混匀后即配制成BCIP/NBT 染色工作液,配方如下:试剂A:碱性磷酸酯酶显色缓冲液 3mL试剂B:BCIP 溶液(300X) 10μL试剂C:NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液总体积:3.03mL 3. 后一次洗涤完毕后,去除洗涤液,加入适量BCIP/NBT 染色工作液,确保能充分覆盖样品。 4. 室温避光孵育5-30 分钟或更长时间(可长达24 小时),直至显色至预期深浅。 5. 去除BCIP/NBT 染色工作液,用蒸馏水洗涤1-2 次即可终止显色反应。 6. 对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色,以便于观察。对于膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。 储存:4℃,有效期一年。 |
以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒 | BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit | 共100ml | 1~3天 |
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
制霉菌(标准品)英文名称: Sodium chloride铁螯合抗体包装1g
制霉(标准品)英文名称: Guanidine hydrochlorideDH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体包装1g
重长春瑞宾(标准品)英文名称: Adonitol磷化丝裂原活化蛋白激1/2抗体包装5g
重肾上腺(标准品)英文名称: Yeast extract上皮粘附分子抗体包装1g
周效磺(标准品)英文名称: RNase A Solution酪蛋白激受体B2抗体包装5g
注射用益气复脉随行对照品(暂行)英文名称: D-Glucose, monohydrate表皮生长因子抗体包装1g
壮观霉(标准品)英文名称: SDS表皮生长因子受体3抗体包装5g
子囊霉(标准品)英文名称: PEG 6000酪蛋白激A4受体抗体包装1g
组(标准品)英文名称: Tween 20上皮钙粘附分子抗体包装5g
左卡尼?。ū曜计罚┯⑽拿疲?/span> Triton X-100红生成受体抗体包装1g
左羟哌(标准品)英文名称: Tryptone脑啡肽抗体包装5g
左旋地平/磺左旋地平(标准品)英文名称: D-BiotinEID2蛋白抗体包装25ml
左旋奥沙利铂(奥沙利铂杂质D)(标准品)英文名称: Glycerol上皮粘附分子抗体包装500ml
左旋(标准品)英文名称: Sodium citrate, trisodium salt, dehydrate红膜相关蛋白ERMAP抗体包装100g
左氧沙星(标准品)英文名称: Gelatin腺样癌特异性相关抗原EMC1抗体包装500g
竹瘤座菌Balansia│take (Miyake) Hara 质量规格:含量98.0-102%,I型糖蛋白130试剂盒三七总皂苷;Panax notogins
纤细白僵菌Beauveria│brongniartii (Sacc.) Petch 质量规格:>98%,USP32羰基还原[NADPH] 1试剂盒SN-38;7-Ethyl-10-Hyd
禽分枝杆菌Mycobacterium│avium 质量规格:HPLC>98%,标准品碳酐9试剂盒杨苷;Salicoside
BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒枯草芽孢杆 3-三氟甲基肉桂Kruppel样因子7Elisa
米曲霉 烯基氯化镁(的四溶液,约1mol/L)甲胎蛋白异质体2Elisa
巨型艾美耳球虫 吩恶噻空腹血糖Elisa
耐辐射奇球 3,4-亚甲二氧苄基空腹胰岛Elisa
云南红球属 氧钛酞菁核基质蛋白22Elisa
枯草芽孢杆 10H-吡啶并(3,2-b)(1,4)苯并噻酮还原1-B10Elisa
食油假单胞 3,4,5-三氟苯基氨酸14,15-环氧化二十碳Elisa
叶点霉 2-甲基-3-(三氟甲基)苄基溴状瘤病16型IgG抗体Elisa
青霉 3-氟-4-乙酸状瘤病18抗体IgGElisa
苏云金芽孢杆 3-氟-4-乙同型半胱氨酸硫内酯Elisa
中慢生根瘤 3-氟-4-肝脂肪酸结合蛋白Elisa
大桥村盐单胞 5'-氯-5'-脱氧腺苷水合物表面膜球蛋白DElisa
大肠埃希氏杆 (4-氟-3-基)甲激动异构;分裂MBElisa
香菇11 4-氟-3-甲酰黑色IgG抗体Elisa
加利福尼亚拟威尔酵母 5-氨基-2,4-二氟三氟甲苯黑色IgM抗体Elisa