详细介绍
实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。
ELISA Kit检测试剂盒优点多,更加方便我们的科研学者进行科学实验,是科研实验的好伙伴。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
ADMA ELISA Kit | GOY-E98844 |
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样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
注意事项:
1.加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
人颗粒体蛋白(GRN)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human GRN (Granulin) ELISA Kit
人S100钙结合蛋白P(S100P)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human S100P (S100 Calcium Binding Protein P) ELISA Kit
人补体受体2 (CR2/CD21)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CR2/CD21 (Complement Receptor 2) ELISA Kit
人白细胞分化抗原30配体(CD30L)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CD30L (Cluster of Differentiation 30 Lligand) ELISA Kit
人白细胞分化抗原28(CD28)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CD28 (Cluster of Differentiation 28) ELISA Kit
人环腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH/CD38)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human cADPRH/CD38 (Cyclic ADP Ribose Hydrolase) ELISA Kit
人游离前列腺特异性抗原(F-PSA)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human F-PSA (Free Prostate-Specific Antigen) ELISA Kit
人B淋巴细胞激活抗原B7-2(LAB7-2/CD86)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human LAB7-2/CD86 (B-Lymphocyte Activation Antigen B7-2) ELISA Kit
人绒毛膜促性腺激素β肽(CGβ)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CGb (Chorionic Gonadotropin Beta Polypeptide) ELISA Kit
人可溶性半乳糖凝集素3(LGALS3)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human LGALS3 (Lectin-Galactoside Binding Soluble 3) ELISA Kit
人表皮生长因子受体2(EGFR2)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human EGFR2 (Epidermal Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit
人封闭蛋白5(CLDN5)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
人N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体2B(GRIN2B)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human GRIN2B (Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 2B) ELISA Kit
人N-甲基-D-天氡氨酸离子能谷氨酸受体1(GRIN1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human GRIN1 (Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1) ELISA Kit
ADMA不对称二甲基精氨酸ELISA Kit二羟丙茶碱E;Coronarin E CAS 117591-81-8 规格: 20mg 订购|咨询
东莨菪苷;Scopolin CAS 531-44-2 规格: 20mg 订购|咨询
丹参素钠;Sodium danshens CAS 67920-52-9 规格: 20mg 订购|咨询
常春藤苷D;Hederacoside D CAS 760961-03-3 规格: 20mg 订购|咨询
雌酚;Estrone CAS 53-16-7 规格: 20mg 订购|咨询
补骨脂宁;Corylin CAS 53947-92-5 规格: 20mg 订购|咨询
表没食子儿茶素没食子酸酯;(-)-Epi CAS 989-51-5 规格: 20mg 订购|咨询
磺胺哒嗪;纯品型;标准品;有证书 CAS 80-32-0 规格: 0.25g 订购|咨询
草净;纯品型;标准品;有证书 CAS 1014-70-6 规格: 0.25g 订购|咨询
烯草酸;纯品型;标准品;有证书 CAS 87546-18-7 规格: 0.1g 订购|咨询
吡嘧磺隆;纯品型;标准品;有证书 CAS 93697-74-6 规格: 0.1g 订购|咨询
喹唑;纯品型;标准品;有证书 CAS 136426-54-5 规格: 0.1g 订购|咨询
异瘟净;纯品型;标准品;有证书 CAS 26087-47-8 规格: 0.1g 订购|咨询
胺丙畏;纯品型;标准品;有证书 CAS 31218-83-4 规格: 0.1g 订购|咨询
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。*,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。