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公司動態(tài)

轉(zhuǎn)化細胞存活測試

閱讀:111          發(fā)布時間:2017-11-17

(1)計算轉(zhuǎn)化細胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù)。 
  (2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細胞數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),再乘以104,即為每ml中之細胞數(shù)目。 
  (3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。 

2、材料: 

  0.4%w/v trypan blue(GibcoBRL15250-061);Erythosin bluish stain;取0.1gram Erythrosin bluish(SigmaE-9259)及0.05gram preservative methyl paraben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline;血球計數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometerandcoverslip);計數(shù)器(counter);低倍倒立顯微鏡;粒子計數(shù)器(Coultercounter,CoulterElectronics)。

3、步驟: 

  (1)取50μl細胞懸浮液與50μl trypan blue(orErythrosinbluish)等體積混合均勻于1.5ml小離心管中。
  (2)取少許混合液(約15μl)自血球計數(shù)盤chamber上方凹槽加入,蓋上蓋玻片,于100倍倒立顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞則為藍色(或紅色-Erythrosin bluish)。 
  (3)計數(shù)四個大方格之細胞總數(shù),再除4,乘以稀釋倍數(shù)(至少乘以2,因與trypanblue等體積混合),zui后乘以104,即為每ml中細胞懸浮液之細胞數(shù)。若細胞位于線上,只計上線與右線之細胞(或計下線與左線之細胞)。 

  注:4大格細胞總數(shù)×稀釋倍數(shù)×104/4=細胞數(shù)/ml;每一大格的體積=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml 

4、范例: 

  T75 monolayer culture制成10ml細胞懸浮液,取0.1ml溶液與0.1ml trypan blue混合均勻于試管中,取少許混合液加入血球計數(shù)盤,計數(shù)四大方格內(nèi)之細胞數(shù)目。 
轉(zhuǎn)化細胞數(shù)/方格:55,62,49,59;死細胞數(shù)/方格:5,3,4,6;細胞總數(shù)=243 
平均細胞數(shù)/方格=60.75;稀釋倍數(shù)=2 
細胞數(shù)/ml:60.75×104×2(稀釋倍數(shù))=1.22×106
細胞數(shù)/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106 
存活率:225/243﹦92.6%
2-FLUORO-5-IODO-6-METHYLPYRIDINE    2-氟吡啶-3-硼酸頻哪酯        672-15-1    
2-Fluoro-5-methyl-3-pyridinecarboxaldehyde    3-己醇        605-39-0    
2-Fluoro-5-methylpyridine-3-boronic acid    4,4'-ethylenedianiline        599-04-2    
2-Fluoro-5-nitrobenzotrifluoride    688-37-9        317-34-0    
2-Fluoro-5-nitropyridine    623-49-4        1,2,4-三氟苯    
2-fluoro-6-(trifluoromethyl)benzene-1-sulfonyl chloride    1H-Pyrazole-3-boronic acid pinacol ester        87-97-8    
2-Fluoro-6-methylpyridine    630-05-7        328-79-0    
2-fluorobenzylamine    全氟庚烷    三七皂苷R1    77-60-1    
2-fluoroethyl acetate    609-65-4        2-氟吡啶    
2-Fluoropyridine-4-boronic acid    1-碘-2-硝基苯        87-52-5    
2-Fluoropyridine-4-carboxylic acid    666747-06-4        322-35-0 
轉(zhuǎn)化細胞   

 

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